[发明专利]一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法

说明书

本发明公开了一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，包括如下步骤：(1)配置多种抗生素的标准工作液，采用HPLC‑MS/MS方法检测各个抗生素的浓度，然后绘制标准曲线；(2)样品前处理；(3)固相萃取；(4)采用HPLC‑MS/MS方法结合标准曲线检测待测样中各抗生素的浓度。本发明所公开的方法可以同时对水产品中18种(4类)抗生素精准检测，降低了检测成本，提高了检测效率。对水产品中蛋白质和脂质等基质进行了去除，降低了基质效应，在多次实验中均具有较高的回收率，稳定性好(RSD低)，提高了检测精准度和分析结果的准确性。为水产品中抗生素残留的快速精准检测和健康风险评估奠定了理论基础和提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及抗生素残留检测技术领域，特别涉及一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法。

背景技术

抗生素是由微生物或高等动植物所产生的次级代谢产物，也可以由人工合成，按其化学结构和性质可分为磺胺类，大环内酯类，喹诺酮类和四环素类等。抗生素作为一种抗菌剂和生长促进剂，在畜牧业和水产养殖业被广泛使用。由于抗生素的难降解性及在水产养殖业的长期使用，短时间内不能排出，极易残留在生物体内。残留的抗生素不仅会对水生动物产生毒性作用，而且也能引起抗性细菌的耐药性，由于耐药基因的传播和扩散，对人类健康产生潜在影响。所以对水产品中抗生素残留的检测意义重大。

随着抗生素在水产品中的广泛使用，对抗生素的检测方法提出了更高的要求，亟待开发可同时快速高效检测多种抗生残留的方法。现有的检测手段并不能满足目前多类抗生素的同时检测，并且水产品中基质复杂，脂质和蛋白质对抗生素的检测存在严重干扰，所以对水产品中多种抗生素同时精准定量检测提出挑战。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，以达到检测种类多、回收率高、稳定性强、成本低、基质效应少目的。

为达到上述目的，本发明的技术方案如下：

一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，包括如下步骤：

(1)配置多种抗生素的标准工作液，采用HPLC-MS/MS方法检测各个抗生素的浓度，然后绘制标准曲线；

(2)取水产品肌肉组织于绞肉机中匀浆，取匀浆后的肌肉于离心管中，加入提取液，涡旋，超声提取，离心，取上清液于旋蒸瓶中，上清液旋蒸至体积不再变化，将剩余液体转移到离心管中，加入乙腈饱和正己烷和过量无水硫酸钠，涡旋振荡，去除上层正己烷，将下层液体用超纯水复溶，等待固相萃取；

(3)固相萃取SPE小柱依次用甲醇和超纯水活化，然后对样品进行过柱处理，样品过柱后，依次用超纯水和甲醇的水溶液淋洗小柱，真空抽干，最后用氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中；在水浴条件下用氮吹仪吹干；剩余液体用甲醇复溶，于-20℃放置24h以上，之后对样品离心，取上清液经滤膜过滤，即为待测样；

(4)采用HPLC-MS/MS方法结合标准曲线检测待测样中各抗生素的浓度。

上述方案中，步骤(1)中的多种抗生素包括磺胺嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉、磺胺-6-甲氧嘧啶、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、强力霉素、四环素、土霉素、罗红霉素、泰乐菌素和克拉霉素，共18种抗生素。

上述方案中，抗生素的标准工作液配制方法如下：

配制抗生素标准工作液一：18种抗生素各称取1mg用甲醇定容至1L，浓度为1mg/L；

配制抗生素标准工作液二：取1mL抗生素标准工作液一用甲醇定容至10mL，浓度为100ug/L；

采用上述两种标准工作液配制浓度分别为1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg、50ug/kg、100ug/kg和200ug/kg的抗生素标准工作液；