[发明专利]一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法

权利要求书

1.一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)配置多种抗生素的标准工作液，采用HPLC-MS/MS方法检测各个抗生素的浓度，然后绘制标准曲线；

(2)取水产品肌肉组织于绞肉机中匀浆，取匀浆后的肌肉于离心管中，加入提取液，涡旋，超声提取，离心，取上清液于旋蒸瓶中，上清液旋蒸至体积不再变化，将剩余液体转移到离心管中，加入乙腈饱和正己烷和过量无水硫酸钠，涡旋振荡，去除上层正己烷，将下层液体用超纯水复溶，等待固相萃取；

(3)固相萃取SPE小柱依次用甲醇和超纯水活化，然后对样品进行过柱处理，样品过柱后，依次用超纯水和甲醇的水溶液淋洗小柱，真空抽干，最后用氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中；在水浴条件下用氮吹仪吹干；剩余液体用甲醇复溶，于-20℃放置24h以上，之后对样品离心，取上清液经滤膜过滤，即为待测样；

(4)采用HPLC-MS/MS方法结合标准曲线检测待测样中各抗生素的浓度。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，步骤(1)中的多种抗生素包括磺胺嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺喹恶啉、磺胺-6-甲氧嘧啶、诺氟沙星、依诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、恩诺沙星、沙拉沙星、强力霉素、四环素、土霉素、罗红霉素、泰乐菌素和克拉霉素，共18种抗生素。

3.根据权利要求2所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，抗生素的标准工作液配制方法如下：

配制抗生素标准工作液一：18种抗生素各称取1mg用甲醇定容至1L，浓度为1mg/L；

配制抗生素标准工作液二：取1mL抗生素标准工作液一用甲醇定容至10mL，浓度为100ug/L；

采用上述两种标准工作液配制浓度分别为1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg、20ug/kg、50ug/kg、100ug/kg和200ug/kg的抗生素标准工作液；

其中，抗生素标准工作液二用于配置1ug/kg、5ug/kg、10ug/kg和20ug/kg，取样量分别为10uL、50uL、100uL和200uL；抗生素标准工作液一用于配置50ug/kg、100ug/kg和200ug/kg，取样量分别为50uL、100uL和200uL；最后用甲醇定容至1mL。

4.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，步骤(2)具体方法如下：

取水产品肌肉组织于绞肉机中匀浆，称取(2±0.02)g匀浆后的肌肉于50mL离心管中，加入15mL提取液，涡旋1min，超声提取15分钟，在10000r/min、4℃下离心10min，取上清液于250mL旋蒸瓶中，剩余残渣重复提取2次，合并上清液；上清液在40℃旋蒸至体积不再变化，将剩余液体转移到50mL离心管中，加入乙腈饱和正己烷和过量无水硫酸钠，涡旋振荡，去除上层正己烷，将下层液体用超纯水复溶至300mL，等待固相萃取。

5.根据权利要求1或4所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，所述提取液采用乙腈和EDTA-Mcllvaine缓冲液，体积比为1:1。

6.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，步骤(3)的具体方法如下：

固相萃取SPE小柱依次用6mL甲醇和6mL超纯水活化，然后对样品进行过柱处理，速度为3-5mL/min，样品过柱后，依次用6mL超纯水和6mL5％甲醇的水溶液淋洗小柱，真空抽干30min，最后用6mL5％氨水的甲醇溶液洗脱，收集洗脱液于玻璃试管中；在40℃水浴条件下用氮吹仪吹干；剩余液体用甲醇复溶至1mL，于-20℃放置24h以上；之后样品在13000r/min、4℃下离心5min，取上清液经0.22um滤膜过滤，即为待测样。

7.根据权利要求1所述的一种同时检测水产品中多种抗生素残留的方法，其特征在于，步骤(4)中，质谱检测参数为：

离子源：API-ESI源；脱溶剂气温度：500℃；离子喷雾电压：5000V；检测方式：多反应监测；

幕帘气体压力、雾化器压力和辅助气体压力分别设置为30.0psi、50.0psi和50.0psi；

色谱条件为：

色谱柱：安捷伦Eclipse Plus-C18，规格为2.1mm×150mm,3.5μm；

流动相A：含有0.1％甲酸的超纯水；

流动相B：乙腈；流速：0.2mL/min。