[发明专利]一种油炸薯片中羧甲基赖氨酸含量的检测方法

说明书

本发明公开一种油炸薯片中羧甲基赖氨酸含量的检测方法，包括以下步骤：称取样品并进行脱脂处理；用磷酸盐缓冲溶液配制酸性蛋白酶溶液；向装有脱脂后样品的离心管中加入酸性蛋白酶溶液，再加入同位素内标，最后将离心管密封后涡旋混匀，使样品水解；水解完成后离心收集上清液，并用甲酸溶液浸提样品中的残留物并离心收集上清液；将水解后的上清液和甲酸溶液浸提后的上清液混合过滤得预处理样品液；采用MCX固相萃取柱萃取净化预处理样品液得洗脱液，将洗脱液吹干、复溶、过滤得待测溶液；采用超高效液相色谱‑串联质谱法对待测溶液进行检测，通过内标法曲线计算CML的含量。本发明操作简便，准确度高、灵敏度好、精确度高。

技术领域

本发明涉及食品检测技术领域，具体涉及一种油炸薯片中羧甲基赖氨酸(N^ε-carboxymethyllysine，CML)含量的检测方法。

背景技术

多数食品在热加工的过程中都会产生CML，CML通过食品介质进入人体后会积聚于多个不同的组织器官中，达到一定数量后，会直接影响组织器官的功能，导致机体的病理变化。CML与人体许多疾病的发生密切相关，能促使糖尿病、肾病、动脉粥样硬化等疾病的发展和人体器官的快速衰老。马铃薯中含有丰富的淀粉、蛋白质等生成CML的前体物质，在以马铃薯为原料进行食品加工的过程中，尤其是油炸、焙烤等深加工方式会生成大量的CML。

传统的用于检测CML含量的方法主要有酶联免疫吸附法(Enzyme-LinkedImmunosorbent Assay，ELISA)、气相色谱-质谱法(Gas Chromatography-MassSpectrometry，GC-MS)、反相-高效液相色谱法(Reversed Phase-High PerformanceLiquid Chromatography, RP-HPLC)、液相色谱-质谱法(Liquid Chromatography-MassSpectrometry, LC-MS)和荧光传感检测法等，目前这些方法都有一定的局限性。由于样品基质比较复杂，ELISA法容易受到杂质的干扰，特异性抗体选择比较困难，定量分析结果不可靠。GC-MS法和RP-HPLC法中为了提高检测的灵敏度并降低检测限都需要对样品进行复杂的柱前衍生化处理。LC-MS法中由于存在“柱外效应”现象，如果流动相的流型发生变化，样品的滞留和扩散会使色谱峰显著变宽，导致柱效率降低。荧光传感检测法虽然前处理简单、快速高效和灵敏度高，但是该方法的检出限(Limit of Detection，LOD)较高，对于食品中痕量CML的检测能力还有待进一步提升。另外，由于CML在C₁₈色谱柱中保留性很差，需要通过在流动相中添加三氟乙酸或九氟戊酸等离子对试剂以增加保留性，但这些试剂在增加保留时间的同时会因抑制离子化效率而导致检测灵敏度降低，并且很难从色谱柱上清洗干净而对色谱柱造成损害。目前国内外尚无推荐使用的食品中CML含量检测的标准方法。

中国专利CN103293243公开了一种食品中CML含量的检测方法，并具体公开了脱脂、硼氢化钠还原、三氯乙酸沉淀蛋白质、110°C蛋白质盐酸(6.0mol/L)水解、9-芴甲基氯甲酸酯衍生化、固相萃取和复溶等预处理步骤。但是此方法耗时较长、操作步骤繁琐、并且由于蛋白质水解使用的盐酸浓度和温度较高，会对实验室造成环境污染和仪器设备造成腐蚀。研究开发一种操作简便、环境友好、准确和快速的CML含量的检测新方法迫在眉睫。

发明内容

针对上述现有技术中耗时较长、操作步骤繁琐、浓酸对环境污染并对仪器腐蚀严重等问题，本发明目的是提供一种与目前存在的方法相比具有明显优势的，一种油炸薯片中CML含量的检测方法。

本发明是以下述方式实现的：

一种油炸薯片中羧甲基赖氨酸(N^ε-carboxymethyllysine，CML)含量的检测方法，具体包括以下步骤：

（1）称取样品并对其进行脱脂处理；

（2）用磷酸盐缓冲溶液配制酸性蛋白酶溶液；