[发明专利]一种芝麻离体再生培养方法以及百里香酚作为所用培养基添加剂的应用

权利要求书

1.百里香酚作为植物组织培养基添加剂在促进和提高芝麻外植体的愈伤组织诱导及分化率与再生幼苗生根方面的应用。

2.一种芝麻离体再生培养方法，其特征在于：在愈伤组织的诱导及分化与再生幼苗的生根培养阶段所用的培养基中均添加有百里香酚，其具体培养方法包括下述步骤：

第一步，无菌苗培养

按1L 的1/2MS培养基中加入30g蔗糖,8g琼脂粉的比例配制生长培养基备用；

选取籽粒饱满的芝麻种子用乙醇和水清洗干净，再用配制的HgCl₂ 溶液处理，然后用无菌水清洗干净后种植在生长培养基上置于培养室内培养6天，获得无菌苗；

第二步，切取子叶外植体

将第一步获得的无菌苗用手术刀切取子叶外植体，并保留2mm叶柄；

第三步，愈伤组织的诱导及分化

按1L的 MS减铵培养基中加入6-苄基腺嘌呤2mg，萘乙酸0.1mg，百里香酚50 mg，蔗糖30g，琼脂粉8g的比例，配制诱导及分化培养基备用；所述MS减铵培养基指不含硝酸铵的MS基础盐培养基；

将第二步切取的子叶外植体接种到诱导及分化培养基上，置于培养室内离体培养；培养过程中，首先可观察到外植体明显膨大，然后在子叶柄的伤口处出现愈伤组织，进而可看到分化产生的再生芽；当再生芽长到高度1cm左右时，切除未分化的外植体部分，仅保留带有愈伤组织的再生幼苗继续培养；在整个培养过程中，每两周进行一次继代培养；

第四步，再生幼苗的生根培养

按1L的MS培养基中加入吲哚丁酸0.5mg，百里香酚50mg，蔗糖30g，琼脂粉8g的比例配制生根培养基备用；

当再生幼苗生长到高度1.5-2.0cm时，转移到生根培养基上，置于培养室中诱导再生苗的生根，直至长成发达的根系，得到完整的再生植株。

3.根据权利要求2所述的芝麻离体再生培养方法，其特征在于：所述生长培养基，诱导及分化培养基和生根培养基配制时，利用氢氧化钾调节pH值，所述pH为5.7-5.9。

4.根据权利要求2所述的芝麻离体再生培养方法，其特征在于：第一步中无菌苗培养时，首先利用黑布遮光培养4天，然后去掉黑布继续培养2天；培养室内条件为：温度25±2℃；湿度65%；16h光照、8h黑暗交替进行，光照强度5000-6000 Lux。