[发明专利]一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法

权利要求书

1.一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：包括以下步骤：

步骤1：人类排出粪便后，立即进行采集工作，通过对人们的粪便进行取样，然后将粪便样品放置在取样品中，3-8个取样瓶分别进行取样工作，然后将取样瓶放置在温度为20-50℃的环境中；

步骤2：所述粪便中放置保持液，保持液的成分为：0.23-0.57M的EDTA，1.2-3.25的NaCl，0.15-0.8M的Tris；

步骤3：粪便运输至实验室时，通过针管吸取350μL-600μL的粪便放置在离心管中，然后通过人工继续摇匀，然后通过无菌均质过滤袋中进行过滤工作；离心管上方通过橡胶密封盖密封；

步骤4：然后放入离心设备中；离心3-8次，然后将其置于温度为2-6℃低温离心分离洗涤2-5次，其离心分离洗涤时，弃去离心管中清澈透明，在显微镜下管观察没视野极少细菌的上清液和下层固体杂质，而将呈白色且稀释7倍后显微镜下观察没视野细菌多至无法计算的中间层菌层保留，获得中间菌液层，即得到肠道菌群液。

2.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：所述每个取样品内部均装有10-20ml的粪便，且取样瓶采用人工均匀摇动4-10min，每个取样瓶上方采用密封塞密封，取样瓶采用光滑的透明的玻璃管。

3.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：将装有粪便样本的离心管在4000-13000rpm条件下离心3-7min，保留沉淀，去除上清液。

4.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：所述均质过滤袋内部设有滤膜夹层，滤膜夹层上的滤膜孔孔径范围在0.095mm-0.35mm之间。

5.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：将均质过滤液用稀释液稀释，稀释液采用无菌水或者生理盐水，最后采用拍打式均质器均质，样品均质过滤后，制得均质过滤液。

6.根据权利要求1所述的一种基于肠道菌群研究酒精性骨重构的方法，其特征在于：所述离心分离洗涤操作前，采用分级过滤器进行，分级过滤器中过滤网的孔径从大到小在0.15-0.5范围内设置。