[发明专利]一种六出花的组织培养方法

说明书

一种六出花的组织培养方法，包括将外植体进行离体芽诱导、继代培养、生根培养以及炼苗移栽的过程，所述离体芽诱导、继代培养的培养基为MS培养基，并且含有6‑BA和NAA；所述外植体为六出花鲜切花花茎部位。本申请对于外植体的部位进行了特殊选择，并不是选择常规的地下根茎等部位，这是六出花组织培养成功的基础，另外一个发明点则是培养基，特别是离体芽诱导培养基以及继代培养培养基的选择，都是以MS培养基为基础，复合具有浓度梯度配合的6‑BA以及NAA，实现六出花的快速组织培养。

技术领域

本申请涉及一种六出花的组织培养方法。

背景技术

六出花又名秘鲁百合，属石蒜科。六出花属多年生草本花卉，因其花色丰富、花型奇异、盛开时典雅富丽，成为切花新秀，近年来已经跻身于世界十大切花之列。近年来，已开始应用于盆栽观赏。由于国外少数大公司品种垄断，目前六出花在我国还处于引种阶段，在切花市场还不多见，仅在北京、上海等少数大城市高档切花市场有一定量应市销售。随着人民生活水平提高，全国花卉消费额以年均10％以上的速度在递增，而六出花作为切花新贵，市场前景广阔。

在生产上大多采用成本较低的种子播种进行实生繁殖，但存在明显的繁殖后代分化变异大的问题，无法进行规模化生产。分株繁殖是常见的一种繁殖方式，分株繁殖就是利用根茎上未萌发的隐芽，当根茎分段切开后，刺激隐芽萌发即可成新的植株。但是由于国外少数大公司品种垄断，国内难以购买到优良六出花品种的地下根芽，进一步限制了六出花商业化生产。

组织培养技术是在人为创造无菌条件下将植物离体器官(如根、茎、叶等)置于培养基内，并放在适宜的环境中，进行连续培养以获得细胞、组织或个体的技术，是一种生物学的现代科学技术。目前，经文献及专利检索，丁超，杨萍，王计平以及任志强的论文“六出花的再生繁殖技术研究”(中国农学通报，2016，32(25)：75-78)涉及到盆栽六出花的组织培养，但是实验结果是组织培养失败，无法出苗并形成整体植株。其他相关六出花的文献专利，都是针对分株繁殖及鲜切花保鲜技术方面的文章及专利。经文献及专利检索，尚无六出花组织培养成功的技术路线。

发明内容

为了解决上述问题，本申请提出了一种六出花的组织培养方法，包括将外植体进行离体芽诱导、继代培养、生根培养以及炼苗移栽的过程，所述离体芽诱导、继代培养的培养基为MS培养基，并且含有6-BA和NAA；所述外植体为六出花鲜切花花茎部位。本申请对于外植体的部位进行了特殊选择，并不是选择常规的地下根茎等部位，这是六出花组织培养成功的基础，另外一个发明点则是培养基，特别是离体芽诱导培养基以及继代培养培养基的选择，都是以MS培养基为基础，复合具有浓度梯度配合的6-BA以及NAA，实现六出花的快速组织培养。

优选的，还包括外植体的处理过程：将外植体流水冲洗，冲洗干净后用洗涤剂进行洗涤，叶片与茎交叉处用毛刷洗涤，然后再用清水冲洗，冲洗干净后移至超净工作台进行外植体灭菌。

优选的，外植体灭菌采用酒精处理10-15s，然后升汞处理3-5min，最后用无菌水冲洗5-10次。

优选的，所述离体芽诱导包括如下步骤：将外植体接种到离体芽诱导培养基上进行培养，所述离体芽诱导培养基中6-BA的浓度为0.1-1mg/L；NAA的浓度为0.2-2mg/L。

优选的，所述离体芽诱导培养基的pH为5.8-6.0，培养温度为23-25℃，光照时间为10-14h/天，光照强度为2000-2500Lx，培养25-30天。

优选的，所述继代培养包括如下步骤：将经过离体芽诱导之后成活的组培苗，从底部切下，进行继代培养，转移到继代培养培养基中，所述继代培养培养基中6-BA的浓度为1-2mg/L；NAA的浓度为0.1-0.5mg/L。

优选的，所述继代培养培养基中的琼脂浓度为5.5-6g/l，蔗糖浓度25-35g/l，培养条件为温度为23-27℃，光照时间为10-14h，光照强度为2000-2500lx。