[发明专利]一种砧木改良方法及应用

权利要求书

1.一种砧木改良方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1：合成传递基因tRNA^Met、3×CTCT、3×CTCTt；

所述传递基因tRNA^Met的基因序列如序列表序列1所示；

所述传递基因3×CTCT的基因序列如序列表序列2所示；

所述传递基因3×CTCTt的基因序列如序列表序列3所示；

步骤2：克隆促进分枝及提早开花功能基因SlZFP2，将步骤1所述合成传递基因与功能基因共同构建到pCAMBIA1305载体上，用于后续融合表达；

所述功能基因SlZFP2的基因序列如序列表序列4所示；

步骤3：采用农杆菌侵染的方式在烟草中转基因过表达pCAMBIA1305-SlZFP2-tRNA^Met、pCAMBIA1305-SlZFP2-3×CTCT、pCAMBIA1305-SlZFP2-3×CTCTt，以上述转基因烟草为砧木，野生型番茄为接穗，进行番茄/烟草异源嫁接；

步骤4：取嫁接口及嫁接口上下不同位置茎段及花，提取植物总RNA，反转录成cDNA，RT-PCR检测SlZFP2-tRNA^Met、SlZFP2-3×CTCT、3×CTCTt在番茄/烟草异源嫁接体系中的运输情况；

步骤5：调查不同转基因砧木上野生型番茄的分枝及开花情况。

2.如权利要求1所述的砧木改良方法，其特征在于：步骤1所述传递基因tRNA^Met是在原基因tRNA^Met序列两端分别添加SalI和BglII酶切位点形成；

步骤1所述传递基因3×CTCT是在原基因3×CTCT序列两端分别添加SalI和BglII酶切位点形成；

步骤1所述传递基因3×CTCTt是在原基因3×CTCTt序列两端分别添加SalI和BglII酶切位点形成。

3.如权利要求2所述的砧木改良方法，其特征在于：步骤2所述将合成传递基因与功能基因共同构建到pCAMBIA1305载体上的具体步骤如下：

S21、将步骤1所述可传递基因片段tRNA^Met、3×CTCT、3×CTCTt与pCAMBIA1305载体共同采用SalI和BglII进行双酶切，形成酶切产物；

S22、将酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，Axgen回收试剂盒回收目标片段；

S23、将回收目标片段与pCAMBIA1305载体用T4连接酶连接，构建pCAMBIA1305-tRNA^Met、pCAMBIA1305-3×CTCT、pCAMBIA1305-3×CTCTt三个可传递载体；

步骤2所述克隆促进分枝及提早开花功能基因SlZFP2的具体步骤如下：

S24、采用CTAB法提取番茄和烟草叶片RNA；

S25、将步骤S24提取的RNA采用PrimeScript 1st Strand cDNA Synthesis Kit试剂盒反转录成cDNA；

S26、设计引物克隆番茄SlZFP2基因全长序列，引物序列如下：

SlZFP2-F：ATGAGTTATGAACCAAACACGG；

SlZFP2-R：TTAAAGCCTTAATGACAAATCAAG。