[发明专利]一种PCV2的IPMA中和抗体检测方法

权利要求书

1.一种PCV2的IPMA中和抗体检测方法，其特征在于，具体步骤如下：

(1)将PK15细胞消化离心后制备成含1.0×10⁵cells/mL的细胞悬液，每孔100μL铺到96孔板上，置于37℃5％CO₂培养箱中培养12h，待细胞完全贴壁，将等体积的PCV2病毒液和临床血清37℃孵育1h，然后接种到96孔板内的PK15细胞上，培养48h待细胞长满后取出96孔板；同时设立正常接毒细胞对照孔；

(2)用预冷的无水乙醇固定，加入预冷的无水乙醇，每孔50μL，-20℃放置30min；弃去无水乙醇，PBST清洗，拍干；

(3)加入5％的脱脂奶粉进行封闭，每孔200μL，37℃温箱放置2h；PBST清洗，拍干；

(4)加入PCV2阳性抗体，用PBS按照1:400稀释，每孔加入50μL，37℃温箱放置1h；PBST清洗，拍干；

(5)加入羊抗猪IgG-HRP，用PBS按照1:1000稀释，每孔加入50μL，37℃温箱放置1h，PBST清洗；最后每孔加入PBST 50μL，DAB显色5min，终止反应，在倒置荧光显微镜进行观察。

2.根据权利要求1所述的一种PCV2的IPMA中和抗体检测方法，其特征在于，所述PCV2病毒液的制备方法如下：将临床采集的病料组织进行研磨，按照1mg组织样品加入1mL PBS溶解，反复冻融3次，取上清；12000rpm离心5min，用0.22μm滤器过滤，获得PCV2病毒液。

3.根据权利要求1所述的一种PCV2的IPMA中和抗体检测方法，其特征在于，所述临床血清的制备方法如下：将采集的血液进行离心，收集血清，用于后期临床血清检测。