[发明专利]新冠病毒S蛋白RBD区域的特异性抗体及其制备方法与应用

说明书

本发明涉及一种用SARS‑Cov‑2的S蛋白RBD区域免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。本发明依靠骆驼科动物的免疫系统筛选、鉴定并制备特异性识别、结合新冠病毒表面S蛋白RBD区域的抗体，所得到的抗体特异性强，亲和力高，相对分子质量小，可溶性高，组织渗透性强，分布性好，扩散和代谢迅速，结构简单，容易进行基因工程改造，人源化简单，稳定性高，耐酸碱pH，耐高温，量产成本较低，易于大规模重组制备，并且具有潜在的临床诊断和治疗价值。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及新冠病毒S蛋白RBD区域的特异性抗体及其制备方法与应用。

背景技术

抗体是一种主要由浆细胞分泌，被免疫系统用来鉴别与中和外来物质如细菌、病毒等外来物的蛋白质，该外来物被称为抗原。抗体和抗原的结合完全依靠非共价键的相互作用，这种特异性的结合机制使得抗体可以捕获外来微生物以及受感染的细胞，进一步诱导其他免疫机制对其进行攻击，或直接中和其目标。抗体及抗体相关产品已经被广泛应用于生命科学与医学等研究领域，基于抗原-抗体特异性结合而衍生的诸多实验技术奠定了科学研究与临床治疗的重要基础，例如免疫诊断、免疫印迹、酶联免疫吸附、流式细胞分析等等。

新型冠状病毒引发的疫情在世界范围内加速蔓延。在研究新冠病毒的过程中，抗体是一个非常重要的研究工具，对于患者诊断、病毒分析与研究等都具有重大的价值和意义。自疫情爆发初始，世界各地均开始着手开发新冠病毒特异性的抗体。根据近期的文献报道，世界上多个研究机构均已经开发出特异性识别并结合新冠病毒表面S蛋白的鼠单抗，他们的主要技术方案是：(1)制备新冠病毒抗原，例如灭活的新冠病毒颗粒、分离提取的新冠病毒不同成分等；(2)将抗原注射至大鼠或小鼠体内，依靠动物的免疫系统产生抗体；(3)采集动物的血液并分离、提取出血清，再进一步分离出含有特异性抗体的成分。

上述基于鼠等动物的免疫系统产生新冠病毒表面S蛋白的抗体并分离提取的技术，有以下缺点：(1)抗体的特异性有限：S蛋白结构较大、空间折叠复杂，传统的鼠单抗难以识别S表面复杂的空间结构，研究人员难以得到针对各个结构域的抗体；(2)抗体的稳定性较差：上述鼠单抗，需要在低温(4摄氏度)下进行储藏、运输、测试与验证等工作才能维持抗体的浓度、特异性等特征，不利于大规模应用于研究的开展；(3)规模化批量生产成品高：上述鼠单抗是全长的免疫球蛋白，需要在哺乳动物细胞等成本较为高昂的表达系统中进行重组表达后进行分离、纯化提起，操作复杂、成本昂贵，不利于规模化批量生产。

发明内容

本发明克服现有技术的缺陷，设计并实施有效、可行的抗体筛选与制备技术方案，获得能够特异性识别并结合新冠病毒表面S蛋白RBD区域的抗体，进行批量生产制备并对其应用。

本发明的上述目的通过以下具体方案实现。

第一方面，本发明提供用SARS-Cov-2的S蛋白RBD区域免疫骆驼科动物所得的抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段。

在一些实施方案中，所述骆驼科动物选自单峰驼、双峰驼、美洲驼、骆马、羊驼和小羊驼，优选为羊驼。

在一些实施方案中，所述抗体为纳米抗体，所述抗体活性片段为纳米抗体活性片段。

在一些实施方案中，所述抗体为单克隆抗体或者多克隆抗体。

在一些实施方案中，所述抗原结合蛋白、抗体或抗体活性片段与所述SARS-Cov-2的S蛋白RBD区域结合的kd值在3000nM以下，优选在1500nM以下，更优选在600nM以下，更优选在100nM以下，更优选在10nM以下,更优选在5nM以下,更优选在1nM以下。