[发明专利]实时荧光定量PCR检测HHV7病毒的方法及试剂盒

权利要求书

1.一种实时荧光定量PCR检测HHV7病毒的方法，其特征在于，按以下条件进行：

1)提取待测样品总DNA；

2)制备反应体系，每份反应体系包括预混液、一对引物及相应的探针；所述预混液为TaqMan Universal Master Mix；所述引物包括正向引物和反向引物，

所述正向引物的核苷酸序列为：GACACATATGCTTGATAATGTCATGGAC，

所述反向引物的核苷酸序列为：CACCTTGTTTGTGTATGCGTCTAGG；

所述探针的核苷酸序列为：FAM-TCCTTGTGCAACAGCCACGCGC-BHQ；

3)梯度稀释DNA模板，得到标准曲线样品；所述DNA模板的核苷酸序列为：

5’ACTCTCAGAAATTGGAAACAGTCTAGTCTTCCAAGAAAAGATCAAGCGAAAGATTCATGTTTTGCTCGCAAGTCTGTGCAATCCTTTGGAAATGTATTTTTGGACACATATGCTTGATAATGTCATGGACATTGAAACGATGTTTTCTCCTTGTGCAACAGCCACGCGCAAAGATTTAACTCAAAGAGTTGTCAACAACATTTTATCCTATAAAAACCTAGACGCATACACAAACAAGGTGATGAACACACTTTCTGTATATAG 3’；

4)试剂的阴性对照、待测样品的阴性对照以及加入了标准品的待测样品上样；

5)QPCR反应；

6)绘制标准曲线，分析待测样品的检测结果。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤3)中，标准曲线样品的浓度梯度为每5μl含有1x10⁵，1x10⁴，1x10³，1x10²及10个靶序列拷贝。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中，采用ABI 7500PCR仪进行QPCR反应。

4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述步骤5)中，QPCR反应程序为：

Step1：95℃，10min；

Step2：95℃，15sec，然后60℃，1min；

Step2执行40cycles。

5.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述方法用于细胞库中的HHV7病毒的检测。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述DNA模板为包含模板靶序列的质粒。

7.一种用于实时荧光定量PCR检测HHV7病毒的引物及探针的组合，其特征在于，

所述引物包括正向引物和反向引物，

所述正向引物的核苷酸序列为：GACACATATGCTTGATAATGTCATGGAC，

所示反向引物的核苷酸序列为：CACCTTGTTTGTGTATGCGTCTAGG；

所述探针的核苷酸序列为：FAM-TCCTTGTGCAACAGCCACGCGC-BHQ。

8.一种实时荧光定量PCR检测HHV7病毒的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含引物和探针，

述引物包括正向引物和反向引物，

所述正向引物的核苷酸序列为：GACACATATGCTTGATAATGTCATGGAC，

所示反向引物的核苷酸序列为：CACCTTGTTTGTGTATGCGTCTAGG；

所述探针的核苷酸序列为：FAM-TCCTTGTGCAACAGCCACGCGC-BHQ。

9.如权利要求8所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括预混液，所述预混液为TaqMan Universal Master Mix。

10.如权利要求9所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括QPCR反应的DNA模板；所述DNA模板的核苷酸序列为：

5’ACTCTCAGAAATTGGAAACAGTCTAGTCTTCCAAGAAAAGATCAAGCGAAAGATTCATGTTTTGCTCGCAAGTCTGTGCAATCCTTTGGAAATGTATTTTTGGACACATATGCTTGATAATGTCATGGACATTGAAACGATGTTTTCTCCTTGTGCAACAGCCACGCGCAAAGATTTAACTCAAAGAGTTGTCAACAACATTTTATCCTATAAAAACCTAGACGCATACACAAACAAGGTGATGAACACACTTTCTGTATATAG 3’。