[发明专利]一种检测DNA碱基切除修复通路关键突变基因的试剂盒

说明书

本发明提供了一种检测DNA碱基切除修复通路关键突变基因的试剂盒，所述探针库由SEQ ID NO.1～213所示探针组成，将该探针库制备成检测试剂盒可用于与DNA碱基切除修复通路相关的关键突变基因的检测。使用该探针库对待分析的目标DNA片段进行富集，然后再对富集后的DNA片段通过测序手段进行测序，从而实现对基因检测的有效性。与DNA碱基切除修复通路相关的关键突变基因可用于预测肿瘤发生的倾向性、评估肿瘤恶性程度和临床预后、指导新药筛选与研发，因此，本发明对基因功能性的研究方向起到重要的指导意义。

技术领域

本发明属于基因检测技术领域，具体涉及一种检测DNA碱基切除修复通路关键突变基因的试剂盒。

背景技术

异常的DNA损伤修复通路与肿瘤发生倾向性及诱导DNA损伤类抗肿瘤药物对细胞的敏感性关系密切。DNA碱基切除修复通路主要修复内源性氧自由基损伤的DNA碱基，以及TMZ等烷化剂类抗肿瘤药物引起的DNA损伤，是DNA修复机制中最重要的途径之一。修复过程具体分为两种通路：单核苷酸切除修复（Single-nucleotide BER, SN-BER）和长片段切除修复（Long-patch BER, LP-BER）。当碱基发生损伤时，两种通路都起始于DNA糖基化酶对损伤的识别，接着切除损伤碱基与脱氧核糖磷酸骨架之间的糖苷键，形成脱碱基（Apurinic/Apyrimidinic, AP）位点。所有的脱碱基位点都通过APE1内切酶剪切磷酸二酯键，留下3’羟基（3’-OH）和5’脱氧核糖磷酸（5’-dRP）部分。此后，DNA聚合酶β（Pol β）被招募过去。正常情况下，Pol β的水解酶活性切除脱氧磷酸骨架部分，聚合酶活性紧接着合成单核苷酸填补缺口，形成的缺口结构由DNA连接酶 III (DNA Ligase III)进行缝合并完成修复，这个通路称为SN-BER。但是，当Pol β的水解酶活性被抑制或脱氧核糖磷酸骨架被氧化时，Pol β只能持续合成核苷酸，使脱氧核糖磷酸骨架所在的下游序列被替换并形成分枝结构，类似于polδ在冈崎片段成熟时候的替代合成。这样，LP-BER修复通路就开始了。Polβ替代合成形成的分枝结构是FEN1的理想底物，经过FEN1的剪切后DNA形成一个缺口，紧接着DNA Lig I或XRCC1/DNA Lig III复合体对其缝合完成修复。除此之外，Pol β与FEN1也可能通过接力合作机制（Hit-and-Run model）进行修复，这种修复方式中，2-11个核苷酸会被替换合成。

合成致死（Synthetic Lethality）的策略近年来在肿瘤的研究中得到广泛应用。合成致死在肿瘤研究中的概念为：当将两个不在同一修复通路中的重要基因的功能抑制掉其中之一时，细胞不会致死，但是将这两个基因的功能都抑制掉后，细胞死亡。在临床上，如果肿瘤细胞中存在其中之一的突变，而正常细胞中该基因正常，我们可以将另外一个基因作为靶点，并将其功能抑制住，达到特异性杀死肿瘤细胞，个体化治疗的目的。

前期研究发现，DNA碱基切除修复通路参与的基因发生胚系遗传突变、特异组织中体细胞突变与肿瘤的发生、治疗效果高度相关。其中，OGG1基因R46Q、S326C等变异体酶活性降低，罹患肾癌、肺癌的几率增大；PARP1基因V762A变异体酶活性降低，导致罹患各种肿瘤的比率增大；另外，DNA聚合酶Polβ在大约30%的肿瘤中发生突变，包括移码突变，片段删除，以及点突变等。这些基因的突变导致DNA碱基切除修复通路有效性的改变（增强、减弱或缺失），对肿瘤的发生、预后、治疗策略的制定都具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供一种检测DNA碱基切除修复通路关键突变基因的试剂盒。

为了实现上述目的，本发明提供以下技术方案：

一种检测DNA碱基切除修复通路关键突变基因的试剂盒，所述的试剂盒包括针对DNA碱基切除修复通路关键突变基因的如SEQ ID NO . 1～213所示探针组成的探针库。

进一步的，DNA碱基切除修复通路关键突变基因包括POLB、PARP1、APEX1、OGG1。