[发明专利]一种产N-乙酰氨基葡萄糖的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一株生产N-乙酰氨基葡萄糖的大肠杆菌基因工程菌，其特征在于，所述的基因工程菌株是以大肠杆菌为宿主，包含T7启动子控制的glmS基因，Sc-gna1基因；大肠杆菌甘油激酶突变基因glpK*；木糖启动子控制的来源于T7噬菌体来源的RNA聚合酶基因；以及nagA、nagB、nagC、nagE、manX、manY、manZ、nanE、pfkA九个基因缺陷型；

宿主细胞为E.coliW3110；

基因Sc-gna1的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.1所示；

基因glmS的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.2所示；

基因nagA的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.3所示；

基因nagB的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.4所示；

基因nagC的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.5所示；

基因nagE的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.6所示；

基因manX的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.7所示；

基因manY的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.8所示；

基因manZ的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.9所示；

基因pfkA的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.10所示；

基因glpK*的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.11所示；

基因T7启动子的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.12所示；

基因P_xylF启动子的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.13所示；

来源于T7噬菌体的RNA聚合酶基因的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.14所示；

基因nanE的核苷酸序列为序列表SEQ ID No.15所示。

2.权利要求1所述的工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：

(1)在lacIZ基因位点上整合由木糖启动子P_xylF控制的T7 RNA聚合酶；

(2)构建GlcNAc合成通路：首先敲除GlcNAc的分解代谢途径nagA、nagB、nagC、nagE、manX、manY、manZ、nanE，同时在nagE基因位点上整合氨基葡萄糖-6-磷酸N-乙酰转移酶基因Sc-gna1；在假基因位点yjiV和ycjV整合由P_T7启动子控制的果糖-6-磷酸转氨酶基因glmS；

(3)敲除糖酵解途径中表达6磷酸果糖激酶基因pfkA；同时引入大肠杆菌甘油激酶基因突变glpK*实现复合碳源的代谢分工。

3.权利要求1所述的工程菌在生产N-乙酰氨基葡萄糖中的应用。

4.如权利要求3所述的应用，其特征在于，发酵生产N-乙酰氨基葡萄糖的方法，具体如下：

按10％-15％接种量接种至发酵培养基，32-37℃，200-300rpm培养36-72h；维持pH在7.0-7.2，60％甘油葡萄糖复合碳源维持发酵进行，发酵初始添加终浓度5-20g/L的木糖溶液诱导目的基因表达。