[发明专利]一株二氢吡啶单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

权利要求书

1.一株二氢吡啶单克隆抗体杂交瘤细胞株ABC02，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心CGMCC，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，分类命名为单克隆细胞株，保藏日期2019年11月28日，保藏编号CGMCC No.19177。

2.二氢吡啶单克隆抗体，其特征在于，由权利要求1所述保藏编号为CGMCC No.19177单克隆细胞株ABC02分泌产生。

3.权利要求2所述二氢吡啶单克隆抗体的应用，其特征是：建立二氢吡啶含量的免疫检测方法，应用于食品中二氢吡啶的检测。

4.根据权利要求3所述二氢吡啶单克隆抗体的应用，其特征是：所述食品具体为乳品和其他含有二氢吡啶的食品。

5.二氢吡啶半抗原的制备方法，其特征在于步骤为：将二氢吡啶加入溶于无水吡啶的琥珀酸酐中，加热反应；停止加热后冷却至室温，将反应物转移到冰水浴的稀盐酸中，有大量白色沉淀析出，用去离子水洗涤数次，干燥后得到白色的固体，即为二氢吡啶半抗原。

6.根据权利要求5所述二氢吡啶半抗原的制备方法，其特征在于具体步骤为：将570 mg二氢吡啶加入溶于5 mL无水吡啶的600mg琥珀酸酐中，60℃加热反应6h，停止加热后冷却至室温，将反应物转移到置于冰水浴中的20mL 10%的盐酸中，有大量白色沉淀析出，用去离子水洗涤数次，干燥后得到白色的固体，即为二氢吡啶半抗原。

7.免疫原二氢吡啶-BSA的制备方法，其特征在于步骤为：称取二氢吡啶半抗原将其溶解在DMF中，然后加入EDC，NHS，该混合物在室温搅拌，得到反应液A；称取BSA，溶解于硼酸盐缓冲液中，得到溶液B；随后，逐滴将A液加入到B液中，室温反应，即得偶联物二氢吡啶-BSA混合液，通过透析分离完全抗原和未偶联的小分子半抗原得到免疫原二氢吡啶-BSA。

8.根据权利要求7所述免疫原二氢吡啶-BSA的制备方法，其特征在于具体步骤为：称取1.46 mg的二氢吡啶半抗原将其溶解在600 μL DMF中，然后加入2.62 mg EDC，1.52mg NHS，该混合物在室温搅拌6 h，得到反应液A；称取5 mg BSA，溶解于0.1 M硼酸盐缓冲液中，得到溶液B；随后，逐滴将A液加入到B液中，室温反应8 h，即得偶联物二氢吡啶-BSA混合液，通过透析分离免疫原和未偶联的小分子半抗原得到免疫原二氢吡啶-BSA。

9.包被原二氢吡啶-OVA的制备方法，其特征在于步骤为：取二氢吡啶半抗原，1-乙基碳二亚胺盐酸盐，N-羟基琥珀酰亚胺，用无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，得到A2液，室温搅拌反应；取鸡卵清白蛋白OVA，溶解于硼酸盐缓冲溶液中，得到B2溶液，在室温条件下，逐滴将A2液加入到B2液中，室温反应，即得偶联物二氢吡啶-OVA混合液，通过透析分离包被原二氢吡啶-OVA和未偶联的小分子半抗原，得到包被原二氢吡啶-OVA。

10.根据权利要求9所述包被原二氢吡啶-OVA的制备方法，其特征在于步骤为：称取2.23 mg 二氢吡啶半抗原，3.82 mg 1-乙基碳二亚胺盐酸盐，2.40 mg N-羟基琥珀酰亚胺，用600 μL无水N,N-二甲基甲酰胺溶解，室温搅拌反应6h，得到A2液；称取5 mg鸡卵清白蛋白OVA，溶解于3 mL 0.1 M硼酸盐缓冲溶液中，得到B2溶液，在室温条件下，逐滴将A2液加入到B2液中，室温反应8 h，即得偶联物二氢吡啶-OVA混合液，通过透析分离包被原二氢吡啶-OVA和未偶联的小分子半抗原，得到包被原二氢吡啶-OVA。