[发明专利]一种盐酸土霉素微生物限度检验方法

权利要求书

1.一种盐酸土霉素微生物限度检验方法，其特征在于，所述方法包括以下步骤：

(1)、准备培养基、稀释液、冲洗液及实验用具

培养基：沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)或大豆酪蛋白琼脂培养基(TSA)，冲洗液：0.9％无菌氯化钠溶液；

实验用具：实验用250ml具塞三角瓶、100ml量筒、镊子、内装0.45um滤膜的滤器、5ml吸头，上述用具用呼吸袋封好，121～124℃条件下蒸汽灭菌30～31分钟；

(2)、制备检测样品溶液

A、在洁净室内超净工作台上，把10g盐酸土霉素样品，加入250ml具塞三角瓶中，用灭菌量筒准确量入灭菌的稀释液至100ml，充分振摇，作为1：10的样品溶液；

B、从1：10的样品溶液中，用灭菌的吸头准确吸取10ml到250ml锥形瓶中，再用灭菌的量筒量取90ml灭菌的稀释液到锥形瓶中，充分振摇，作为1：100的样品溶液；

C、从1：100的样品溶液中，用灭菌的吸头准确吸取10ml到250ml锥形瓶中，再用灭菌的量筒量取90ml灭菌的稀释液到锥形瓶中，充分振摇，作为1：1000的样品溶液；

(3)、样品检测及总菌落数报告：

A、霉菌及酵母菌总数(薄膜过滤法)样品检测：将1:10样品溶液5ml放入已润湿的内装0.45um滤膜的滤器内，减压过滤，每次用0.9％的生理盐水100毫升冲洗滤膜，冲洗3次；将滤膜取下，滤膜向上贴在沙氏葡萄糖琼脂平板上，于20-25℃倒置培养7天；同时做阴性对照，阴性对照同上述操作，不加入盐酸土霉素样品,阴性对照不得有菌生长；

霉菌及酵母菌总菌落数报告：

以相当于1克供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数；

沙氏葡萄糖琼脂培养基上的总菌落数为霉菌及酵母菌总数；

若霉菌和酵母菌的总数符合≤100cfu标准，判样品合格，否则为不合格；

需氧菌总数(薄膜过滤法)样品检测：将步骤(2)中1：1000样品溶液50ml放入已润湿的内装0.45μm滤膜的滤器内，减压过滤，每次用0.9％的氯化钠溶液100毫升冲洗滤膜，冲洗5次；将滤膜取下，滤膜向上贴在TSA平板上，于30-35℃倒置培养5天，计数；同时做阴性对照(同上述操作，不加入盐酸土霉素样品),阴性对照不得有菌生长；

需氧菌菌落总数报告：

以相当于1克供试品的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1乘以最低稀释倍数的值报告菌数；

TSA平板上的总菌落数为需氧菌总数；

若需氧菌总数符合≤1000cfu标准，判样品合格，否则为不合格。

2.根据权利要求1所述的一种盐酸土霉素微生物限度检验方法，其特征在于，所述的步骤(3)中检测用的样品溶液在制备完成后在1小时内加入检测培养基。

3.根据权利要求1所述的一种盐酸土霉素微生物限度检验方法，其特征在于，所述步骤(1)中的稀释液采用20％无菌聚乙二醇200。

4.根据权利要求1所述的一种盐酸土霉素微生物限度检验方法，其特征在于，所述步骤(1)中的稀释液采用20％无菌甘油缩甲醛。