[发明专利]分离检测叶酸中叶酸及叶酸光学异构体的方法

权利要求书

1.从叶酸及相关杂质中分离叶酸和/或叶酸光学异构体的方法，其特征在于，所述方法采用的色谱柱是以硅胶表面共价键合O-9-(叔丁基氨基甲酰)奎宁为填料，采用流动相A和流动相B将所述叶酸和/或叶酸光学异构体从所述叶酸及相关杂质中进行分离；所述流动相A为有机溶液，所述有机溶液为甲醇和乙腈的混合溶液；所述流动相B为有机酸和三乙胺的混合溶液；所述流动相A和流动相B中甲醇、乙腈、醋酸和三乙胺的体积比为50:50:3:3；所述相关杂质为杂质A～H、杂质SM1d、杂质SM1k、叶酸光学异构体；所述叶酸和相关杂质的结构式如下：

2.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述流动相流速为0.4～0.6ml/min。

3.根据权利要求1中所述的方法，其特征在于，所述色谱柱柱温为20～30℃。

4.鉴定叶酸及相关杂质中叶酸和/或叶酸光学异构体的方法，其特征在于，利用权利要求1中所述方法将检测物中所述叶酸和/或叶酸光学异构体从所述叶酸及相关杂质中分离，通入检测器进行检测，将检测得到的色谱图与已知叶酸和/或叶酸光学异构体对照品色谱图进行对比，判定检测物中是否含有所述叶酸和/或叶酸光学异构体；所述相关杂质为权利要求1中所述相关杂质；所述检测器波长设定为280±10nm。

5.测定叶酸及相关杂质中叶酸和/或叶酸光学异构体含量的方法，其特征在于，利用权利要求4所述的方法，得到色谱图；利用峰面积归一化法测得所述叶酸和/或叶酸光学异构体的含量。

6.根据权利要求5中所述的方法，其特征在于，所述方法包含如下步骤：

1)配制检测品溶液、对照品溶液；

取供检测品溶于稀释剂中，得检测品溶液；取所述叶酸和/或叶酸光学异构体标准品，用稀释剂溶解制成对照品溶液；

2)分离；

利用权利要求1中所述的方法，将检测品中叶酸和/或叶酸光学异构体从叶酸和相关杂质中分离；

3)鉴定；

利用权利要求4中所述的方法，鉴定所述检测品中是否含有所述叶酸和/或叶酸光学异构体；

4)含量计算；

根据鉴定过程中得到的色谱图，按峰面积归一化法测定检测品溶液中所述叶酸和/或叶酸光学异构体的含量。

7.根据权利要求6中所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述稀释剂为四氢呋喃、甲醇、水、醋酸、三乙胺的混合溶液，其体积比为10:80:10:2.4:3。