[发明专利]结核分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒及其专用引物和探针

权利要求书

1.一种结核分枝杆菌的实时荧光核酸恒温扩增检测试剂盒，其特征在于，包括：

（1）核酸提取液：其包含含有特异性捕获探针的固相支持物和提取探针，其中所述特异性捕获探针用于捕获检测序列，所述提取探针用于与靶标序列特异性结合；

（2）检测液a：其包含第二引物，所述第二引物与第一引物配合，用于扩增靶标序列；

（3）检测液b：其包含第一引物和靶标检测探针，其中所述靶标检测探针与所述靶标序列的扩增产物RNA拷贝特异性结合；

（4）SAT酶液：其包含至少一种RNA聚合酶和M-MLV反转录酶；

其中所述特异性捕获探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述提取探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示，所述第一引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:4所示，所述第二引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:5所示，所述靶标检测探针的核苷酸序列如SEQ ID NO:6所示。

2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

（5）样品预处理液：其包含胍盐、去垢剂和巯基还原剂中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述样品预处理液的组分为：3～5M的胍盐和/或0.1～10%的去垢剂和/或0.1～3%的巯基还原剂、10～100mM 的Tris-HCl、0.1～0.5mM 的EDTA，pH≤6.9。

4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，所述胍盐选自盐酸胍、异硫氰酸胍、硫酸胍、碳酸胍中的一种或多种；所述去垢剂选自十二烷基硫酸钠、十二烷基硫酸锂中的一种或多种；所述巯基还原剂选自半胱氨酸、N-乙酰半胱氨酸、DTT中的一种或多种。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，

所述核酸提取液的组分为：250～800mM HEPES、50～500mg/L磁珠、1～50μΜ所述的特异性捕获探针、25～150pmol/mL所述的提取探针；

所述检测液a的组分为：10～50mM Tris，5～40 mM KCl，10～40mM MgCl₂，1～20mM NTP，0.1～10mM dNTPs，1～10% PVP40，250~750 pmol/mL所述的第二引物；

所述检测液b的组分为：10～50mM Tris，5～40mM KCl，10～40mM MgCl₂，1～20mM NTP，0.1～10mM dNTPs，1～10% PVP40，143~857 pmol/mL所述的第一引物，143~857 pmol/mL所述的靶标检测探针；

所述SAT酶液的组分为：16000~160000U/mL的M-MLV反转录酶、8000~80000U/mL的RNA聚合酶、2～10mM HEPES pH7.5、10～100 mM N-乙酰-L-半胱氨酸、0.04～0.4 mM 醋酸锌、10～100 mM 海藻糖、40～200 mM Tris-HCl pH 8.0、40～200mM KCl、0.01～0.5mM EDTA、0.1～1% (v/v) Triton X-100和20～50% (v/v) 甘油。

6.根据权利要求1-4中任一项所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括：

（6）洗涤液：其含有NaCl和SDS；和/或

（7）矿物油；和/或

（8）阳性对照：含结核分枝杆菌核酸的体系；和/或

（9）阴性对照：不含有结核分枝杆菌核酸的体系。

7.根据权利要求6所述的试剂盒，其特征在于，

所述洗涤液的组分为：HEPES 5～50mM，NaCl 50～500 mM，0.5～1.5% SDS，EDTA 1～10mM；

所述阳性对照为：含10²～10⁵CFU/mL结核分枝杆菌的菌液。