[发明专利]产L-苏氨酸的基因工程菌及其构建方法与应用

权利要求书

1.产L-苏氨酸的基因工程菌，其特征在于，所述基因工程菌选自A～C中的任一种：

A、通过增强大肠杆菌中编码NCBI参考序列NC_000913.3的基因bioABFCD，获得的基因增强菌株；

B、通过弱化大肠杆菌中编码NCBI参考序列NC_000913.3的基因birA，获得的基因弱化菌株；

C、通过增强大肠杆菌中编码NCBI参考序列NC_000913.3的基因bioABFCD，同时弱化大肠杆菌中编码NCBI参考序列NC_000913.3的基因birA，获得的基因工程菌。

2.根据权利要求1所述的基因工程菌，其特征在于，增强的途径选自以下1)～3)中的至少一种：

1)通过将强启动子与所述基因可操作地连接而增强；

2)通过增加染色体上所述基因的拷贝数而增强；

3)通过增加染色体上所述基因启动子的RBS序列的强度而增强；

所述弱化包括敲除或降低所述基因的表达；弱化的方法选自诱变、定点突变、同源重组中的至少一种。

3.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，所述强启动子选自Ptac、Plac、Ptrp、Ptrc。

4.根据权利要求2所述的基因工程菌，其特征在于，定点突变的方法选自S1～S3中的任一种：

S1、对基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S；

S2、对基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第58位氨基酸由Y突变为F；

S3、对基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S，且第58位氨基酸由Y突变为F。

5.根据权利要求1-4任一项所述的基因工程菌，其特征在于，所述大肠杆菌为保藏编号为CGMCC No.13403的大肠杆菌MHZ-0215-2。

6.产L-苏氨酸的基因工程菌的构建方法，其特征在于，所述方法选自以下方案I～V，或任选的组合：

方案I、利用基因工程手段将强启动子Ptac与大肠杆菌中的基因bioABFCD可操作地连接；

方案II、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD的拷贝数；

方案III、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD启动子的RBS序列的强度；

方案IV、利用基因工程手段对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S；

方案V、利用基因工程手段对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第58位氨基酸由Y突变为F。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述方法选自i～vi中的任一种：

i、利用基因工程手段将强启动子Ptac与大肠杆菌中的基因bioABFCD可操作地连接，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S；

ii、利用基因工程手段将强启动子Ptac与大肠杆菌中的基因bioABFCD可操作地连接，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第58位氨基酸由Y突变为F；

iii、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD的拷贝数，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S；

iv、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD的拷贝数，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第58位氨基酸由Y突变为F；

v、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD启动子的RBS序列的强度，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第57位氨基酸由G突变为S；

vi、利用基因工程手段增加大肠杆菌中基因bioABFCD启动子的RBS序列的强度，同时对大肠杆菌中的基因birA进行定点突变，突变后基因birA编码蛋白的第58位氨基酸由Y突变为F。