[发明专利]一种基于ISET原理的循环肿瘤细胞IHC抗原修复方法

权利要求书

1.一种基于ISET原理的循环肿瘤细胞IHC抗原修复方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）在水浴锅加入0.01mol/L枸橼酸钠缓冲溶液，加热至95℃，放入用磁铁固定后的一张循环肿瘤细胞玻片加热15分钟；

（2）修复完成后，取出玻片，使用PBS洗2min*3次。

2.根据权利要求1所述的基于ISET原理的循环肿瘤细胞IHC抗原修复方法，其特征在于，所述枸橼酸钠缓冲溶液的pH值为6.0。

3.一种利用权利要求1或2所述的抗原修复方法修复后循环肿瘤细胞的免疫组化检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

1）将修复后的循环肿瘤细胞玻片中滴加100μl 0.1% Triton X-100，室温孵育15min，DI水洗2min×3次；

2）滴加100μl 0.3% H₂O₂，室温下孵育10min，PBS洗2min×3次；

3）滴加100μl一抗工作液，室温下孵育2h，PBS洗2min×3次；

4)滴加100μl山羊抗兔/小鼠 IgG/HRP，室温下孵育15-30min，PBS洗2min×3次；

5)滴加100μl DAB显色液，室温下孵育3～10min；

6）显色完成后，弃掉DAB显色液，流水冲洗5min，苏木素染色15min；

7）过水漂洗1秒，盐酸酒精分化3-8秒，自来水返蓝15min；

8）75%乙醇（1min），95%乙醇（1min），100%乙醇（1min）梯度乙醇脱水，晾干，中性树脂封片。

9）光学显微镜下镜检。

4.根据权利要求3所述的免疫组化检测方法，其特征在于，步骤3）中，所述一抗工作液为CD45+CD31。

5.根据权利要求4所述的免疫组化检测方法，其特征在于，所述一抗工作液具体制备过程为：取100μlCD45一抗工作液，加入1μlCD31一抗浓缩液混匀即可。

6.根据权利要求3所述的免疫组化检测方法，其特征在于，所述梯度乙醇具体脱水过程为：75%乙醇脱水1min，95%乙醇脱水1min，100%乙醇脱水1min。