[发明专利]一种用于扩增B淋巴细胞免疫组库的引物组及其应用

说明书

本发明提供一种用于扩增B淋巴细胞免疫组库的引物组及其应用。所述引物组包括一组正向引物和一组反向引物；所述正向引物从5′端到3′端包括依次相连的接头序列1、条码序列1和针对免疫球蛋白可变区互补决定区3的特异性序列；其中，所述针对免疫球蛋白可变区互补决定区3的特异性序列如SEQ ID NO.1～12中的任意一项所示；所述反向引物从5′端到3′端依次为接头序列2、条码序列2和针对免疫球蛋白基因恒定区的特异性序列。利用所述引物组对IgAN患者和正常对照组的B淋巴细胞进行扩增，收集文库信息，通过测序分析IgAN患者CDR3的长度和多样性变化。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测领域，具体涉及一种用于扩增B淋巴细胞免疫组库的引物组及其应用。

背景技术

B细胞抗原受体(B cell receptor，BCR)是B细胞识别抗原的一种膜表面免疫球蛋白(SmIg)，具有抗原结合特异性。BCR由两条重链和两条轻链连接而成，其中重链分为可变区(V区)、恒定区(C区)、跨膜区及胞质区；轻链则只有V区和C区。V区由VH和VL两个结构域组成，它们各由三个互补决定区(CDR1，CDR2和CDR3)组成，CDR的氨基酸组成和排列顺序呈现高度多样性，在同一个体内可高达10～10¹²，构成容量巨大的BCR库，赋予个体识别各种抗原、产生特异性抗体的巨大潜能，这三个CDR均参与对抗原的识别，共同决定BCR的抗原特异性。正是这种多样性对健康起着至关重要的作用，免疫蛋白的亚型越多，越能有效抵抗病原体，亚型越少越容易感染疾病。除此之外，其它很多年龄、环境、疾病诱发以及用药等因素也影响着免疫组库的多样性。

肾脏是重要的排泄水分和身体代谢产物的器官。IgA肾病(IgAnephropathy，IgAN)是以IgA为主的免疫球蛋白弥漫沉积在肾小球系膜区以及毛细血管袢，临床表现和病理改变各异的临床病理综合征，是最常见的导致慢性肾脏疾病和进行性症状的肾小球肾炎。IgAN的特征是肾小球中存在IgA显性或共显性免疫复合物沉积。虽然IgA是IgAN患者中Ig的主要成分，但在80％以上的病例中，IgG、IgM等其他抗体亚型或两者同时存在于lgA的同一区域。高达40％的成人IgAN患者将发展为进行性肾功能衰竭，并最终需要透析或肾移植后20年内诊断活检。研究表明，引起IgA蛋白结构改变的基因突变、抗多糖IgG和IgAs等自身抗体的改变以及病毒感染等可能会影响IgAN的发展。

然而，上述遗传因素、异常的IgA免疫复合物或病毒感染等本身并不足以引起IgAN，IgAN发病机制尚不清楚。IgAN是一种自身免疫性疾病，因此，了解IgAN中免疫系统的变化有助于研究IgAN的发生原因，能够帮助人们更好地预防、诊断和治疗IgAN。

发明内容

鉴于现有技术中存在的问题，本发明提供一种用于扩增B淋巴细胞免疫组库的引物组及其应用，利用所述引物组对IgAN患者和正常对照组的B淋巴细胞进行扩增，收集文库信息。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供一种用于扩增B淋巴细胞免疫组库的引物组，所述引物组包括一组正向引物和一组反向引物；

所述正向引物从5′端到3′端包括依次相连的接头序列1、条码序列1和针对免疫球蛋白可变区互补决定区3(CDR3)的特异性序列；其中，所述针对免疫球蛋白可变区互补决定区3的特异性序列如SEQ ID NO.1～12中的任意一项所示；所述反向引物从5′端到3′端依次为接头序列2、条码序列2和针对免疫球蛋白基因恒定区的特异性序列。

优选地，所述针对免疫球蛋白基因恒定区的特异性序列如SEQ ID NO.13～17所示。

利用所述引物组对IgAN患者的B淋巴细胞免疫组库信息进行扩增，该引物组的扩增片段覆盖率较高，降低了PCR扩增偏好性，特异性和灵敏度较好，可获得更丰富的微生物组信息，增加了文库序列的复杂度，减少扩增过程中二级结构的产生；