[发明专利]一种新冠肺炎防治干细胞库的构建方法

说明书

一种新冠肺炎防治干细胞库的构建方法，包括采集产前诊断后剩余羊水细胞、新生儿脐血、脐带和胎盘组织，以干细胞诱导、永生化基因转染、新冠病毒靶向干扰基因装配、新冠病毒易感基因敲除或敲入、新冠病毒抗体产生基因装配的方法，制备防治新冠肺炎的永生化干细胞、DNA重组干细胞、RNA干扰干细胞、基因沉默干细胞及各种干细胞载体疫苗，将所制干细胞产品按供者姓名、ABO血型或HLA分型集中收藏于‑196℃液氮，建立可再生利用的专用干细胞库，当新冠病毒流行时可从干细胞库中提取各分型干细胞或其疫苗进行培养扩增，以患者自身或同型干细胞进行个体化治疗，以减少传统干细胞或疫苗防治的免疫排斥等副作用，并解决COVID‑19特效药物及干细胞缺乏问题。

技术领域

本发明涉及一种新冠肺炎防治干细胞库的构建方法，为生物医学领域的传染病防治技术。

背景技术

新型冠状病毒(SARS-CoV-2)已对全球公众健康构成严重威胁，由于缺乏有效的抗病毒药物，新型冠状病毒病(COVID-19)的治疗仍充满挑战，亟需探索新的有效治疗方法，以提高临床危重型患者的救治率。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSC)是一群起源于中胚层的多能干细胞，具有自我更新、多向分化和免疫调控潜能。MCS作为种子细胞可用于修复/替代受伤或病变的多种组织器官，全世界已开展多项MSC的临床研究，用于治疗病毒、细菌等诱发的重症肺炎、 ARDS、呼吸衰竭等呼吸系统疾病。MCS具有低免疫原性和广泛的免疫调节功能，因其不表达 CD40、CD80、CD86等共刺激分子和主要组织相容性复合体(MHC)II类分子，故引起免疫排斥反应的可能性较小，同时其对免疫细胞的调节效应不受MHC分子的限制，即对自体和异体的免疫细胞都可发挥免疫调节效应。MCS作为一种新型的免疫治疗方案，还具有良好的免疫调节和强大的抗炎特性，其可通过感知炎症信号迁移至炎症部位，通过直接接触和旁分泌效应发挥作用。被免疫细胞吞噬清除的MSC仍具有诱发吞噬细胞分泌IL10、TGF-β、IDO等免疫调控效应分子的能力。当COVID-19导致肺上皮细胞和内皮细胞凋亡，且诱导免疫细胞在肺部聚集和过度活化时，MSC向肺损伤部位迁移，分化为正常的肺泡上皮细胞，修复屏障功能，调节上皮细胞功能以促进肺泡内液体的清除，调节免疫功能，抑制炎性因子风暴，最终促进损伤肺组织的修复，在COVID-19的应急治疗中干细胞被赋予了较大的希望。但未见对用于 COVID-19治疗的干细胞进行相关功能改造、预期收藏、自身或同型输注的文献报道。

RNA干扰(RNAi)是指特异性沉默外源基因的抗病毒作用。当将外源靶基因整合到宿主细胞基因组时，外源靶基因能利用宿主细胞转录dsRNA，dsRNA被宿主细胞质中的核酸内切酶 (Dicer)切割成具有特定长度和结构的多个小片段siRNA(大约21～23bp)，siRNA在细胞内RNA解旋酶的作用下解链成正义链和反义链，由反义siRNA与体内的内切酶、外切酶和解旋酶结合，形成RNA诱导的基因沉默复合物(RISC)。当外源基因入侵宿主细胞时，RISC与外源基因表达的mRNA的同源序列特异性结合，在结合部位切割同源mRNA，被切割的断裂mRNA 随即降解，从而诱发宿主细胞针对外源mRNA的降解作用。siRNA不仅能引导RISC切割同源单链mRNA，而且可作为引物与靶RNA结合并在RNA聚合酶的作用下合成新的dsRNA，新合成的dsRNA再由Dicer切割成大量的次级siRNA，进而形成RISC而发挥作用，使RNAi的作用进一步放大，最终将外源靶mRNA完全降解。但未见构建新冠病毒RNA干扰载体并将所述RNA干扰载体转染干细胞从而制成新冠病毒RNA干扰型干细胞的文献报道。