[发明专利]一种检测microRNA-21的生物传感器及其制备方法与应用

权利要求书

1. 一种检测microRNA-21活性的生物传感器，其特征在于，包括DNA Walker、TrackDNA、Protect Probe、金纳米颗粒、缓冲液、外切酶III、目标物miRNAs；

所述的DNA Walker的序列如SEQ No.1所示：5’---SH- TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTTCACCGACGTATGACTGAT ---3’；

所述的Track DNA的序列如SEQ No.2所示：5’ ---SH—ACGTCGGTG ---3’；

所述的Protect Probe的序列如SEQ No.3所示：5’--- CATACGTCGGTGGAGATG ---3’；

所述的Track DNA、DNA Walker的5’端标记的SH。

2.权利要求1所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

（1）将DNA Walker和Protect Probe退火杂交，形成双螺旋结构，得到反应液；

（2）取步骤（1）的反应液和Track DNA一起放入到纳米金溶液中，分阶段增加盐浓度，使Track DNA核酸链5’端标记的SH-同Au形成Au-S键，从而将核酸链稳定的标记在金纳米颗粒的表面，得到修饰了核酸链的纳米金颗粒溶液；

（3）在10×Buffer 缓冲液中，加入步骤（2）得到的溶液，再加入外切酶III，加入目标物microRNA-21；样品混合后置于37℃温浴中反应；

（4）反应完成后，取反应液放置于硅片上面进行拉曼光谱检测分析，得到相应的拉曼指纹图谱。

3. 根据权利要求2所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）中DNA Walker和Protect Probe的浓度比1:1。

4. 根据权利要求2所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）的退火条件为：将DNA Walker和Protect Probe混合后放95℃水浴5分钟，关掉电源，自然冷却至室温，取出反应液，放-20℃备用。

5. 根据权利要求2所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中反应液和Track DNA的浓度比为15:1。

6. 根据权利要求2所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的步骤（2）中纳米金与Track Chain核酸链的浓度比为1:5000。

7. 根据权利要求2所述的检测microRNA-21活性的生物传感器的制备方法，其特征在于，所述的（2）中盐为NaCl，其终浓度为0.3 M。

8.权利要求1所述的检测microRNA-21活性的生物传感器在检测microRNA-21活性上的应用。

9.权利要求2所述的制备方法制备的检测microRNA-21活性的生物传感器在药物敏感实验中检测microRNA的应用。