[发明专利]快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物及试剂盒

说明书

本发明提供一种快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物及试剂盒，涉及分子生物学检测技术及分子诊断领域。本发明的基于用反转录热对流实时荧光PCR的方法，针对甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒各自保守区域开发的特异性多重快速诊断体系，同时还检测人内源基因进行样本质控。该多重引物和试剂盒的特异性好、灵敏度高，还具有简便、快速和实用的特点，满足出入境和现场环境下对甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒的检测需要。

技术领域

本发明涉及分子生物学检测技术及分子诊断领域，特别是涉及一种快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物及试剂盒。

背景技术

新型冠状病毒肺炎是一种急性感染性肺炎，其病原体是一种新型冠状病毒，2020年1月12日被世界卫生组织命名为“2019-nCoV”。该病毒传染能力强，感染人后初始症状多为发热、乏力和干咳，并逐渐出现呼吸困难等严重表现，多数预后良好，但部分严重病例可导致肺炎、严重急性呼吸综合征、肾衰竭，甚至死亡，因此对感染者、携带者和疑似人群进行准确检测对疫情防控至关重要。

同为呼吸道易传染病原体的流行性感冒病毒(Influenza viruses,Flu)，简称流感病毒，是引起流行性感冒的病原体，流行性感冒是由甲(A)、乙(B)、丙(C)三型流感病毒分别引起的急性呼吸道传染病，它传染性强、传播快、潜伏期短、发病率高。人流感主要是甲型流感病毒和乙型流感病毒引起的，甲型流感病毒比较容易发生变异，流感大流行就是甲型流感病毒出现新亚型或旧亚型重现引起的，乙型病毒通常引起局限性流行。

当下，新型冠状病毒快速蔓延时期也正是流感高发期，新型冠状病毒与流感病毒传播方式相同、感染后部分症状相同或相似，甚至部分患者出现混合感染，难以通过临床表现、胸部影像学进行鉴别。新冠疫情防控所面临一个重要问题就是把新冠肺炎病毒感染者和流感病毒感染者分开。因此为达到精准区分、分类治疗及避免交叉感染，开发同时检测流感病毒和新冠病毒的产品具有重要意义。

目前市场上常见的新型冠状病毒核酸检测产品或新型冠状病毒和流感病毒多重检测产品多为普通荧光PCR法检测产品，耗时长，除核酸提取外扩增检测过程基本需要1.5～2h，且对实验室环境要求较高。

因此，本发明意于开发一种快速、灵敏度高、特异性强的新冠流感多重核酸检测试剂盒，具有可运用于检验所、出入境、口岸等现场快速检测的优势。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物，该多重引物是针对甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒各自保守区域开发设计，并同时检测人内源基因进行样本质控，可适用于反转录热对流实时荧光PCR的方法，扩增甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒高保守区，22min内即可结束反应，具有高效、灵敏度高的特点。

一种快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物，包括：甲型流感病毒M基因、乙型流感病毒NS基因、新型冠状病毒N基因以及人源性内参基因的特异性引物对和特异性探针；

所述甲型流感病毒M基因特异性引物对为：

正向引物：5’-ACTTGAAGATGTCTTTGCAGGGA-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物：5’-TGGGCACGGTGAGCGTGAACA-3’(SEQ ID NO.2)；

所述甲型流感病毒M基因特异性探针为：

5’-ACACCGATCTTGAGGTTCTCATGGAAT-3’(SEQ ID NO.3)；

所述乙型流感病毒NS基因特异性引物对为：

正向引物：5’-CACTGATGATCTTACAGTGGAG-3’(SEQ ID NO.4)；