[发明专利]快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物及试剂盒

权利要求书

1.一种快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物，其特征在于，包括：甲型流感病毒M基因、乙型流感病毒NS基因、新型冠状病毒N基因以及人源性内参基因的特异性引物对和特异性探针；

所述甲型流感病毒M基因特异性引物对为：

正向引物：5’-ACTTGAAGATGTCTTTGCAGGGA-3’(SEQ ID NO.1)；

反向引物：5’-TGGGCACGGTGAGCGTGAACA-3’(SEQ ID NO.2)；

所述甲型流感病毒M基因特异性探针为：

5’-ACACCGATCTTGAGGTTCTCATGGAAT-3’(SEQ ID NO.3)；

所述乙型流感病毒NS基因特异性引物对为：

正向引物：5’-CACTGATGATCTTACAGTGGAG-3’(SEQ ID NO.4)；

反向引物：5’-ACCGCAGTTTCAGCTGCTCG-3’(SEQ ID NO.5)；

所述乙型流感病毒NS基因特异性探针为：

5’-ATGAAGAAGATGGCCATCGGATCCTCAAC-3’(SEQ ID NO.6)；

所述新型冠状病毒N基因特异性引物对为：

正向引物：5’-ACGTGGTCCAGAACAAACCCA-3’(SEQ ID NO.7)；

反向引物：5’-GAACGCTGAAGCGCTGGG-3’(SEQ ID NO.8)；

所述新型冠状病毒N基因特异性探针为：

5’-ACCAGGAACTAATCAGACAAGGAACTGA-3’(SEQ ID NO.9)；

所述人源性内参基因特异性引物对为：

正向引物：5’-GCCACCACTGCCCTGATGTGC-3’(SEQ ID NO.10)；

反向引物：5’-GCCCTGCTGCGGTGTGATGGG-3’(SEQ ID NO.11)；

所述人源性内参基因特异性探针为：

5’-ATCCTGCTGGTGGGCACCAAGAAGGAC-3’(SEQ ID NO.12)。

2.根据权利要求1所述的多重引物，其特征在于，所述甲型流感病毒M基因特异性探针在5’端标记FAM荧光基团，在3’端标记BHQ1淬灭基团；

所述乙型流感病毒NS基因特异性探针在5’端标记HEX荧光基团，在3’端标记BHQ1淬灭基团；

所述新型冠状病毒N基因特异性探针在5’端标记Texas Red荧光基团，在3’端标记BHQ2淬灭基团；

所述人源性内参基因特异性探针在5’端标记CY5荧光基团，在3’端标记BHQ2淬灭基团。

3.权利要求1或2所述的快速检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的多重引物在制备特异性多重检测甲型流感病毒、乙型流感病毒和新型冠状病毒试剂中的应用。

4.一种用于检测甲型流感、乙型流感和新型冠状病毒的试剂盒，其特征在于，包括试剂Ⅰ和试剂Ⅱ；所述试剂Ⅰ包括Taq聚合酶、MgCl₂、dNTPs和权利要求1或2所述的多重引物；所述试剂Ⅱ为快速逆转录酶。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂Ⅰ中，Taq聚合酶的浓度为0.03～0.05U/μL，MgCl₂的浓度为4～5mM，dNTPs的浓度为0.15～0.25mM，所述甲型流感病毒M基因特异性引物对、乙型流感病毒NS基因特异性引物对、新型冠状病毒N基因特异性引物对、人源性内参基因特异性引物对的浓度均为0.3～0.5μM，所述甲型流感病毒M基因特异性探针、乙型流感病毒NS基因特异性探针、新型冠状病毒N基因特异性探针、人源性内参基因特异性探针的浓度均为0.1～0.3μM。

6.根据权利要求4所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂Ⅱ为冻干形态的快速逆转录酶，所述冻干形态的快速逆转录酶的总量为1400～1600U。