[发明专利]番茄根结线虫病和烟草花叶病毒病抗病基因标记及方法

说明书

本发明涉及一种番茄根结线虫病和烟草花叶病毒病抗病基因标记及方法，通过提出了番茄根结线虫病抗病基因（Mi‑1.2）的2对高效性引物InMi1‑F/InMi1‑R和InMi2‑F/InMi2‑R，番茄烟草花叶病毒病抗病基因（SW‑5b）的3对高效性引物InSW1‑F/InSW1‑R、InSW2‑F/InSW2‑R和InSW3‑F/InSW3‑R，其可以更加准确地判断植株的抗感性。本发明的番茄抗病基因相关标记的引物及方法，其PCR产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳即可检测，扩增带型清晰，且有多个引物可以重复，准确度更高。

技术领域

本发明属于分子标记技术领域，具体涉及一种番茄根结线虫病和烟草花叶病毒病抗病基因标记及方法。

背景技术

番茄(Lycopersicon esculentumMill.)作为一种集鲜食、菜用、观赏于一体的重要蔬菜作物，具有营养价值高、适应性广、栽培容易、经济效益高等优点，在世界各地都有广泛栽种，而我国是世界最大的番茄生产和消费国家之一。近年来，随着番茄产业的迅猛发展，栽培方式的不断创新、丰富，栽培技术的全面改革，番茄生产已成为菜农增收致富和出口创汇的重要途径。番茄市场潜力巨大，种植及推广的经济社会效益可观。但是，近几年来，随着番茄栽培面积的不断扩大，长季、反季或周年种植，致使番茄连作频繁，重茬严重，轮作困难，导致番茄病虫害侵染严重，尤其是像根结线虫病、烟草花叶病毒病这类植物“癌症”为害已成为保护地栽培种的突出问题，轻者减产20％～30％，严重的减产50％以上，甚至绝产。因此，选育多抗保护地专用番茄品种，在提高自研番茄品种的综合“品性”，在打破传统番茄种植生产模式以及促使我国蔬菜产业整体升级和良性发展等方面，具有十分重要的意义。目前育种工作者在番茄常规育种方面取得了很大的突破，并且已经开始利用生物技术开展分子辅助育种，通过选用成熟稳定的各类分子标记技术加快育种进度、加强育种针对性。

为了减少番茄病害的发生，育种工作者利用传统育种方法通过表现型间接对基因型进行选择，但是这种选择方法存在周期长、效率低等许多缺点。随着分子生物学技术的成熟，分子技术在番茄种子辅助育种上得到了广泛的应用。通过DNA分子标记可以针对性的检测番茄根结线虫病抗病基因(Mi-1.2)和番茄烟草花叶病毒病抗病基因(SW-5b)，目前已报道2007年Seah等利用番茄根结线虫病抗病基因(Mi-1.2)相关标记在基因区域开发出的引物SCAR-1-F/SCAR-1-R，在抗病品种中扩增出377bp的片段大小，在感病品种中扩增出432bp片段。2011年Truong等利用番茄烟草花叶病毒病抗病基因(SW-5b)相关标记在基因区域开发出的引物SW-5-2-F/SW-5-2-R，在抗病品种中扩增出464bp/510bp的片段大小，在感病品种中扩增出570bp片段。抗病基因相关标记引物的开发不仅加强了育种的针对性，提高了育种效率，而且促进优质多抗番茄品种的选育，传统育种方法也逐渐被取代。

但是现有的标记引物SW-5-2-F/SW-5-2-R，其判断的准确性还不够，存在一定的误判的情况。

发明内容

本发明为了克服现有技术的不足，提出了番茄根结线虫病抗病基因(Mi-1.2)的2对高效性引物InMi1-F/InMi1-R和InMi2-F/InMi2-R，番茄烟草花叶病毒病抗病基因(SW-5b)的3对高效性引物InSW1-F/InSW1-R、InSW2-F/InSW2-R和InSW3-F/InSW3-R，其可以更加准确地判断植株的抗感性。

一种番茄根结线虫病抗病基因和烟草花叶病毒病抗病基因标记，所述根结线虫病抗病基因上下游标记引物为分别为InMi1-F、InMi1-R或InMi2-F、InMi2-R，所述烟草花叶病毒病抗病基因上下游标记引物分别为InSW1-F、InSW1-R或者InSW2-F、InSW2-R或者InSW3-F、InSW3-R，其中，

InMi1-F：AAATTATGAAAACAAGTATTTGGAG；

InMi1-R：AGAACAGTAAAAAGATGTAAGAACC；