[发明专利]一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法

权利要求书

1.一种用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于全部前处理只需约15分钟，更加方便、快捷、安全、环保，包括以下步骤：

1)吸取10μL样品点在甲醇浸润过的PVDF膜上，风干或氩气吹干，洗涤数次；

2)反应缓冲液配制：0.1M Tris-HCl缓冲液(pH8.4)含6M盐酸胍、0.02M DTT、0.2％4-乙烯基吡啶；

3)将PVDF膜放入100μL上述反应液中，室温避光放置10分钟；

4)取出PVDF膜，去离子水洗涤数次，风干后上样。

2.根据权利要求1所述的用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于：步骤1)直接在PVDF膜上完成反应，避免了换液，脱盐，冻干等步骤，不使用脱盐RP-HPLC小柱，更为经济环保，更节省时间。

3.根据权利要求1所述的用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于：采用一步法完成烷基化反应，更为快捷便利。

4.根据权利要求1所述的用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于：步骤2)弃用β-巯基乙醇，改用刺激性气味和毒性相对较弱的DTT，更为环保安全。

5.根据权利要求1所述的用于生物技术药物N末端半胱氨酸序列分析的快速烷基化方法，其特征在于：步骤3)在一管100μL反应缓冲液中，可同时进行多个不同点膜样品的烷基化反应，相互不影响，同一时间完成，极大的节约了时间，提高了效率。