[发明专利]HDAC5作为孕期感染子代大鼠模型外周标志物的方法

说明书

本发明提供一种评估HDAC5作为孕期感染子代大鼠模型质量早期外周标志物的试验方法，通过在孕9天尾静脉注射Poly I:C激活孕鼠免疫反应制备孕期感染子代大鼠模型，综合行为学与HDAC5表达分析，发现模型大鼠HDAC5异常表达现象早于其异常行为出现，且外周血HDAC5表达的变化与中枢反应一致，故HDAC5可作为评估孕期感染子代大鼠模型质量控制的早期外周标记分子。本发明构思巧妙，方案科学，对人类流行病学研究以及药物的研发具有重要意义。

技术领域

本发明涉及孕期感染子代大鼠模型质量早期外周标志物的研究技术领域，具体涉及评估HDAC5作为孕期感染子代大鼠模型质量早期外周标志物的试验方法。

背景技术

流行病学研究显示母孕期感染是许多精神疾病的环境危险因素，母孕期感染的子代大鼠在成年期表现异常行为，很好的模拟许多精神疾病的临床表现，是病因学研究、药物研发的很好模型，但缺乏早期模型质量的评价标准。

动物水平的研究证实广谱HDACs抑制剂具有改善认知以及缓解神经退行性疾病的病理状态的作用，显示HDACs功能紊乱在精神疾病中发挥作用，提示其可能作为疾病的潜在生物标记分子。

发明内容

本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种评估HDAC5作为孕期感染子代大鼠模型质量早期外周标志物的试验方法，具体方案如下：

一种评估HDAC5作为孕期感染子代大鼠模型质量早期外周标志物的试验方法，包括以下步骤：

步骤1：孕鼠准备：选择SPF级10-14周龄的SD种鼠，新环境适应2周后开始育种，每3-5只雄鼠与1只雌鼠至于一个分段笼里，前三天只允许嗅觉接触无身体接触，3天后放一起交配，次日早上通过阴道栓检查雌鼠是否成功受孕，成功受孕者入组；

步骤2：孕期感染：确定怀孕后第 9 天尾静脉注射10mg/kg 的聚肌胞苷酸（PolyI:C)或等体积生理盐水（对照组），模型组和对照组各随机选取3只，在注射3小时后处死，检测孕鼠外周血血清 IL-1β、IL-6、TNF-α的蛋白水平，通过免疫激活状态确定注射效果，其余孕鼠继续饲养至产下子鼠；

步骤3：行为学检测：将12-15只仔鼠于40天（青春期）、56天（成年期）采用小动物行为采集和分析系统进行Y迷宫、前脉冲抑制实验，分别分析大鼠的学习记忆状态、感觉门控作用，比较两组动物随年龄增长在行为上的差异；

步骤4：对孕期感染子代大鼠模型进行转录组测序及荧光定量PCR分析；

步骤5：对孕期感染子代大鼠模型外周血单核细胞中HDAC5水平进行验证。

基于上述，步骤2中ELISA检测孕鼠血浆IL-6 、IL-1β和TNF-α的表达水平，当结果显示模型组孕鼠血浆炎症因子水平相比于对照组显著升高，则提示孕期免疫激活。

基于上述，步骤3中行为学检测时间控制在8:00-18:00之间，房间内控制适宜的温度、湿度及照明。

基于上述，步骤4中将孕期感染子代大鼠模型青春子代前额叶皮质进行转录组测序分析HDAC5转录水平，并将测序结果通过荧光定量PCR进一步验证。

基于上述，收集孕期感染大鼠模型外周血样，分离单核淋巴细胞，提取RNA，定量分析HDCA5表达水平。

本发明相对现有技术具有突出的实质性特点和显著的进步，具体地说，本发明具有以下优点：

本发明前期通过在孕9天尾静脉注射Poly I:C激活孕鼠免疫反应制备孕期感染子代大鼠模型，在青春期及成年期进行行为学检测，结合青春期转录组测序，定量PCR分析等方法，发现模型大鼠HDAC5异常表达现象早于其行为异常，且外周血与中枢反应一致，故HDAC5可作为评估孕期感染子代大鼠模型质量的早期外周标志物。

附图说明