[发明专利]一种稳定检测抗CD22单抗生物学活性的方法

说明书

本发明公开了一种稳定检测抗CD22单抗生物学活性的方法。所述方法包括将protein A加入到96孔微孔板，静置包被，继而将抗CD22抗体梯度稀释后加入到该96孔微孔板，静置包被，然后向B细胞悬液中加入抗IgM抗体，并加入到上述96孔微孔板进行孵育，最后向该96孔微孔板内加入检测试剂，用酶标仪检测活细胞水平。本方法能稳定、高效地检测抗CD22单抗的生物学活性，为抗CD22单抗活性的质量控制提供了有效的技术手段。

技术领域

本发明属于生物药物活性检测领域，涉及一种稳定检测抗CD22单抗生物学活性的方法。

背景技术

B细胞的异常活化和过度增殖是自身免疫病和B细胞肿瘤形成的重要机制，其结果为促使自身抗体形成、作为抗原提成细胞促进免疫反应的发生、分泌炎性细胞因子、免疫调节失调等，因此，靶向B细胞是治疗自身免疫病和B细胞肿瘤的方式和思路之一。

CD22，又名Siglec-2，是一种I型跨膜糖蛋白，表达于IgM⁺B细胞表面。胞外区含有7个免疫球蛋白样结构域，胞内区含有6个保守的酪氨酸，这些酪氨酸既可组合成ITIM基序，又可组合为内吞基序。尽管CD22交联可以诱发B细胞死亡，但CD22与BCR复合体相互作用，协助引发下游信号转导和促进细胞死亡的作用更加明显，如用特定抗原或抗体交联Burkitt淋巴瘤B细胞表面的IgM后，抗CD22抗体可以协助诱导Burkitt淋巴瘤B细胞的凋亡。基于这一原理，抗CD22抗体可以用于自身免疫性疾病及B细胞肿瘤的治疗。已有文献表明，抗CD22单抗可以明显改善类风湿关节炎患者关节滑膜的炎性浸润，明显降低外周血B细胞数量，并使B细胞上的标志分子如CD19、CD20、CD21等的密度下降，此外，抗CD22单抗还能抑制系统性红斑狼疮患者活化的B细胞分泌炎性因子如IL-6、TNFα等。

单抗的活性测定是对药物的有效成分和含量以及药物效价的测定，是确保抗体类药物有效性的重要质控指标。目前靶向CD22的单抗药物主要分为两大类，一类是抗CD22单抗，另一类为抗CD22的抗体偶联药物(利用CD22的内吞特点)。目前国内尚无已上市的抗CD22的单抗，处于临床开发阶段的抗CD22单抗有深圳赛乐敏公司的人鼠嵌合抗CD22单抗以及UCB/Immunomedics公司的人源化抗CD22单抗，前者的适应症为类风湿性关节炎和系统性红斑狼疮，后者的适应症为非霍奇金淋巴瘤、系统性红斑狼疮和干燥综合征。抗CD22单抗活性检测的难点是确保抗CD22单抗与CD22结合后不被细胞内吞，目前的检测方法采用非特异性结合方式将抗CD22抗体固定在96孔微孔板中，由于非特异性结合方式可能对抗CD22单抗的抗原结合区域有不确定的影响，因此该方法结果不够稳定。

针对上述不足，本发明利用proteinA与抗体Fc段特异性结合的特点，将抗CD22单抗同向、均一地固定在proteinA预包被的96孔板中，使Fab段游离以便很好地发挥后续作用。经过对试验参数的优化，该方法能稳定、高效地检测抗CD22单抗的生物学活性，为抗CD22单抗活性的质量控制提供了有效的技术手段。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于建立一种稳定、高效检测抗CD22单抗生物学活性的方法，所述方法包括：

(1)将proteinA加入到96孔微孔板，静置包被；

2)将抗CD22抗体梯度稀释后加入到步骤1)中的96孔微孔板，静置包被；

3)向B细胞悬液中加入抗IgM抗体，然后加入到步骤2)中的96孔微孔板进行孵育；

4)向步骤3)中96孔微孔板内加入检测试剂，用酶标仪检测活细胞水平。

进一步，步骤1)中proteinA的预包被浓度为0.1-10μg/ml。

进一步，浓度为1μg/ml。

进一步，步骤1)中静置方式为室温静置或2-8℃静置。

进一步，静置方式为室温静置。