[发明专利]一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白及其应用有效
| 申请号： | 202011338163.2 | 申请日： | 2020-11-25 |
| 公开（公告）号： | CN112375127B | 公开（公告）日： | 2022-09-09 |
| 发明（设计）人： | 朱伟峰;谭凯;王芳;程序;仇汝龙;范志宇;陈露 | 申请（专利权）人： | 江苏省农业科学院 |
| 主分类号： | C07K14/235 | 分类号： | C07K14/235;C12N15/31;C12N15/70;A61K39/10;A61P31/04 |
| 代理公司： | 北京德崇智捷知识产权代理有限公司 11467 | 代理人： | 王绎涵 |
| 地址： | 210014 江*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用作 支气管 败血 波氏菌病 疫苗 重组 蛋白 及其 应用 | ||
1.一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白的氨基酸序列为SEQ ID NO:1。
2.根据权利要求1所述一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白，其特征在于，编码所述一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白的核苷酸序列为SEQ ID NO:2。
3.根据权利要求1所述一种用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白，其特征在于，所述重组蛋白添加了His、GST标签，便于纯化和鉴定。
4.一种如权利要求1所述用作支气管败血波氏菌病疫苗的重组蛋白的制备方法，其步骤如下所示:
(1)通过PCR扩增BJL0504株BcfA的第373位到第968位氨基酸所对应的DNA序列；其核苷酸序列为SEQ ID NO:2；
(2)将步骤(1)得到PCR产物连接到骨架质粒上，得到表达载体；
(3)将步骤(2)得到的表达载体转化到宿主菌中诱导表达后，经提取纯化即得到重组蛋白。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述步骤（1）中PCR扩增所采用的引物序列为：上游引物373T-F：cagcaaatgggtcgcggatccACGATCGCGCGCGTCGATAC和下游引物373T-R：gcaagcttgtcgacggagctcGTGAAGCAAGCCATCCACG，用于扩增截短的BcfA。
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤（2）和（3）是通过包括下述步骤的方法实现的：将BcfA的PCR扩增片段整合到骨架质粒PET28a（+）上获得表达载体，然后将整合成功的表达载体转入BL21宿主菌获得重组菌，采用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达重组菌，表达后用超声波破碎仪器进行破碎后，使用Ni磁珠纯化BcfA重组蛋白。
7.根据权利要求1所述重组蛋白在制备支气管败血波氏菌病疫苗方面的应用。
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