[发明专利]一种复杂样品中细菌的快速检测方法

权利要求书

1.一种复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，所述复杂样品为全血或奶茶，所述检测方法包括以下步骤：

(1)将待测样品加入到环介导等温扩增反应体系溶液中，所述待测样品无需预处理，所述的环介导等温扩增反应体系包括：1×LAMP buffer，6mM MgSO₄，1.4mM dNTP，640U/mLBst 2.0DNA聚合酶，特异性扩增目标细菌DNA的引物混合物，1.0mg/mL BSA，0.1mg/mL溶菌酶和荧光染料，再往反应体系中加入水凝胶单体，所述水凝胶单体包括分子量为10000MW的四臂乙二醇丙烯酸酯和分子量为3400MW的巯基-聚乙二醇-巯基，摩尔比为1:2，四臂乙二醇丙烯酸酯以质量体积比10％添加至反应体系中，室温下形成水凝胶；

(2)将水凝胶体系置于60～70℃恒温加热10～60min进行等温扩增反应；

(3)利用荧光成像技术分析等温扩增反应后的水凝胶体系中的荧光信号，计算出待测样品中的目标细菌浓度；

所述检测方法为非诊断方法。

2.如权利要求1所述的复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，所述引物混合物为1.6μM FIP和BIP，0.2μM F3和B3与0.8μM LF和LB的混合物。

3.如权利要求1所述的复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，所述荧光染料为Eva Green、STBR Green、Syto 9和SYTOX Orange中的任意一种。

4.如权利要求1所述的复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，步骤(2)中，水凝胶体系置于防止水分蒸发的密封空间内进行等温扩增反应。

5.如权利要求1所述的复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，步骤(3)中，利用Image J软件对水凝胶体系的荧光图像进行计数分析。

6.如权利要求1所述的复杂样品中细菌的快速检测方法，其特征在于，步骤(3)中，利用发蓝光或紫色的LED手电筒照射水凝胶系统进行计数分析。