[发明专利]一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒

权利要求书

1.一种NT-proBNP均相化学发光检测试剂盒，其特征在于，包括复合检测试剂；所述复合检测试剂为第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物、包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物、包含包被有链霉亲和素的感光微球的第三组合物、稀释缓冲液中的三种或以上；所述稀释缓冲液的pH为6.0，由0.05M MES、0.15M氯化钠、最终质量百分浓度为1-1.5%牛血清白蛋白溶液、最终质量百分浓度为0.2-0.7%的TW20溶液、最终质量百分浓度为0.5-1%的甘油、最终质量百分浓度为0.5-0.8%的TW80溶液、最终质量百分浓度为0.05-0.1%的Proclin-300和去离子水配制而成。

2.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述第一抗NT-proBNP单/多克隆抗体包被的发光微球的第一组合物的制备方法，包括以下步骤：

（1）将100-150μL，浓度为10mg/mL微球混悬液放入试管内，于8000~10000rpm的转速下离心15~20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，同样于8000~10000rpm的转速下离心15~20min，去除上清，加入100-150μL的MES溶液，超声分散，制成初级微球混悬液I；

（2）向步骤（1）制得的初级微球混悬液I中分别加入50-75μL 10mg/mL的EDC和NHS，在30℃摇床下震荡30-60 min，活化1-2次，结束后于8000~12000rpm转速下离心15~20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入200-300μL的pH8.0、0.05M含0.15M氯化钠的HEPES溶液，超声分散，将50-75μg的NT-proBNP抗体加入上述微球试管内，混匀，在30℃摇床震荡偶联2-4h，得微球偶联液；

（3）向步骤（2）制成的微球偶联液中，加入水-牛血清白蛋白-TritonX-100体系封闭剂，混匀，置于30℃摇床上封闭30-60 min，于8000~10000rpm转速下离心15~20min，去除上清液，加入两倍体积的去离子水清洗两遍，加入50μL的贮存液，进一步采用权利要求1所述稀释缓冲液稀释100-200倍后，即可作为工作液使用，放入2-8 ℃冰箱贮存备用。

3.如权利要求2所述的检测试剂盒，其特征在于，所述封闭剂由最终质量百分浓度为0.8-1.2%的牛血清白蛋白溶液，最终质量百分浓度0.05-0.08%的TritonX-100组成；所述贮存液的pH由0.05M TRIS、0.15-0.2M氯化钠、终质量百分浓度为1-1.5%的牛血清白蛋白溶液、终质量百分浓度为0.2%的TW20溶液、终质量百分浓度为0.05%的 Proclin-300和去离子水配制而成。

4.如权利要求1所述的检测试剂盒，其特征在于，所述包含生物素标记的第二抗NT-proBNP单/多克隆抗体的第二组合物制备过程为：50μg的抗体和1~1.67μg的sigma长链生物素加入到50μL，pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中，于25℃下震荡2h，反应后的抗体-生物素液在pH7.4，0.01M的PBS缓冲液中透析24h，进一步用权利要求1所述稀释缓冲液稀释400-600倍后备用。

5.如权利要求4所述的检测试剂盒，其特征在于，所述0.01M的PBS缓冲液由磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和去离子水配制而成，pH值为7.4。