[发明专利]一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的荧光RT-PCR试剂及方法

权利要求书

1.一种检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的多重荧光RT-PCR试剂，其特征在于，为冻干型试剂，包含了荧光RT-PCR除样本核酸外所有必需的组份，由Tris-HCl缓冲液、氯化钾、氯化镁、dNTPs、Taq DNA聚合酶、逆转录酶、冻干赋形剂及检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的特异性引物和探针通过真空冷冻干燥的方法制成。

2.权利要求1中所述的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的多重荧光RT-PCR试剂，其特征在于，所述的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的特异性引物及探针序列如下：

检测甲型流感病毒的正向引物序列为SEQ ID No.1，反向引物序列为SEQ ID No.2，探针序列为SEQ ID No.3；

检测乙型流感病毒的正向引物序列为SEQ ID No.4和SEQ ID No.5，反向引物序列为SEQ ID No.6，探针序列为SEQ ID No.7；

检测冠状病毒SARS-CoV-2的正向引物序列为SEQ ID No.8，反向引物序列为SEQ IDNo.9，探针序列为SEQ ID No.10；

所述的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的探针的5’端用荧光报告基团修饰，3’端用荧光淬灭基团修饰，且三种病毒的探针的荧光报告基团分别从FAM、JOE、HEX、VIC、TET、ROX和CY5中选择不同的一种，荧光淬灭基团为BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA和Eclipse中的任意一种。

3.权利要求1或2所述的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的多重荧光RT-PCR试剂，其特征在于，还含有作为检测内标的人RNase P的特异性正向引物、反向引物和探针，所述的人RNase P的正向引物的序列为SEQ ID No.11，反向引物的序列为SEQ ID No.12，探针的序列为SEQ ID No.13；

所述的RNase P探针的5’端和3’端分别用荧光报告基团和荧光淬灭基团修饰，其中荧光报告基团从FAM、JOE、HEX、VIC、TET、ROX和CY5中选择与甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的探针的荧光报告基团不同的一种，淬灭荧光基团为BHQ1、BHQ2、BHQ3、TAMRA和Eclipse中的任意一种。

4.权利要求1、2或3所述的检测甲型流感病毒、乙型流感病毒及冠状病毒SARS-CoV-2的多重荧光RT-PCR试剂，其特征在于，按每管1份冻干在可直接用于上机的PCR反应管或由其组合成的多连管中，使用时无需解冻，加入水和待测样本核酸，短暂震荡和离心后即可上机检测。