[发明专利]一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法

说明书

本发明公开一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，包括培养基的制备；抗生素平板的配制；菌株的获取；菌株的活化接种；纤维素酶活性菌株的筛选；筛选菌株判定；菌株纤维素酶活性的初步判定。该方法可以简单快速的筛选到具有纤维素酶活性的破囊壶菌，具有操作简单，耗时短，效率高的有点。除了可用于识别产纤维素酶的菌株外,它还可用于初步判定酶活性的高低。菌株产酶越多，出现的透明圈越大，菌株产酶越快,透明圈出现越早。因此，可以根据透明水解圈的大小、透明圈出现的早迟可粗略估计菌株产酶情况。

技术领域

本发明涉及海洋微生物领域，特别涉及针对单细胞异养原生生物破囊壶菌中具有降解纤维素能力的菌株的方法。

背景技术

破囊壶菌是海洋中最常见的类真菌原生生物类群之一，因其高产多不饱和脂肪酸、角鲨烯、类胡萝卜素等高附加值代谢产物的特性而受到越来越多的关注，其中一些菌株已被用于DHA(docosahexaenoic acid)的商业化生产。同时，许多破囊壶菌菌株已被发现具有生产蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等多种胞外水解酶的能力。这些胞外酶可以降解海水中的蛋白质及难降解的有机碎屑，释放固定在其中的营养物质，从而对海洋生物地球化学循环起到重要的促进作用。研究破囊壶菌纤维素酶的生产能力，有助于揭示破囊壶菌在降解海洋有机质及陆源植物碎屑过程中的重要作用，从而帮助我们进一步理解它们的生态功能和碳循环功能。另一方面，我国作为一个农业大国，每年的农作物秸秆产量高达5.7×107吨，面临着较大的纤维素处理压力。因此，研究破囊壶菌对纤维素的降解能力，不仅具有生态学意义，在农业纤维素的利用方面也有一定意义。

发明内容

本发明为克服现有技术的不足，提出一种用于筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，用于筛选具有高纤维素酶活性的菌株。通过该筛选培养基，初步判断菌株的纤维素降解能力。

本发明的技术方案是一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，包括如下步骤：

1)培养基的制备

在本发明中，主要使用两种培养基：

a)MV固体培养基：葡萄糖(10g/L)，蛋白胨(1.5g/L)，酵母提取物(0.1g/L)，琼脂粉(20g/L)，海盐(33g/L)。

b)刚果红固体培养基：羧甲基纤维素钠(2g/L)，NH₄Cl(1g/L)，MgSO₄·7H₂O(0.05g/L)，刚果红(0.4g/L)，K₂HPO₄(0.05g/L)，琼脂(16g/L)，pH＝7。

上述培养基按照其成分，准确称量，加入对应比例的超纯水，搅拌至澄清，使用高压灭菌锅115℃灭菌21分钟，倒入固体平板，待其冷却，即固体培养基配制完成。

在刚果红平板的配制过程中，刚果红试剂在培养基灭菌后，通过滤头过滤除菌添加至培养基，摇匀，即得。

2)抗生素平板的配制：

在破囊壶菌的培养过程中，会遇到染菌的情况，这种情况下，需要使用带有抗生素的平板去除去杂菌。

a)抗生素(5ml/L)：氨苄西林(0.5g)，链霉素(0.75g)，制霉菌素(0.005g)

b)配制及添加方法：将上述药品准确称量，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素溶液。MV培养基经过灭菌后，抗生素溶液通过0.22nm的滤头过滤除菌添加至培养基，摇匀，即得。

3)菌株的获取

本发明所使用的菌株，均从青岛采样所得。而本实验的实验方法不局限于破囊壶菌，适用于海洋细菌，真菌等菌株纤维素酶活性的筛选。

4)菌株的活化接种