[发明专利]一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法

权利要求书

1.一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)培养基的制备；

2)抗生素平板的配制；

3)菌株的获取；

4)菌株的活化接种：利用MV平板对菌株进行活化接种，挑取原平板上的单菌落，使用划线接种的方法，接种至新配制的MV固体平板；

5)纤维素酶活性菌株的筛选：

将新活化后的菌株，挑取单菌落，使用点种法的方法，接种至刚果红纤维素平板，菌株出现透明水解圈，即代表菌株具有纤维素酶活性；

6)筛选菌株判定：

对产生透明水解圈的菌株，观察其菌落形态，并在电子显微镜下观察其菌株形态，对其生长状况进行判断；

7)菌株纤维素酶活性的初步判定：

对于产生透明水解的菌株，测定其透明水解圈的大小，初步判定菌株纤维素酶活性的强弱，使用软件进行处理，测定其水解圈直径。

2.根据权利要求1所述的一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，其特征在于，所述步骤1)主要使用两种培养基：

a)MV固体培养基：葡萄糖(10g/L)，蛋白胨(1.5g/L)，酵母提取物(0.1g/L)，琼脂粉(20g/L)，海盐(33g/L)；

b)刚果红固体培养基：羧甲基纤维素钠(2g/L)，NH₄Cl(1g/L)，MgSO₄·7H₂O(0.05g/L)，刚果红(0.4g/L)，K₂HPO₄(0.05g/L)，琼脂(16g/L)，pH＝7；

上述培养基按照其成分，准确称量，加入对应比例的超纯水，搅拌至澄清，使用高压灭菌锅115℃灭菌21分钟，倒入固体平板，待其冷却，即固体培养基配制完成；

在刚果红平板的配制过程中，刚果红试剂在培养基灭菌后，通过滤头过滤除菌添加至培养基，摇匀，即得。

3.根据权利要求1所述的一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，其特征在于，所述步骤2)在破囊壶菌的培养过程中，会遇到染菌的情况，需要使用带有抗生素的平板去除去杂菌；

a)抗生素(5ml/L)：氨苄西林(0.5g)，链霉素(0.75g)，制霉菌素(0.005g)；

b)配制及添加方法：将上述药品准确称量，加超纯水至5ml，溶解并摇匀至溶液澄清，得抗生素溶液；

c)MV培养基经过灭菌后，抗生素溶液通过0.22nm的滤头过滤除菌添加至培养基，摇匀。

4.根据权利要求1所述的一种筛选具有纤维素酶活性的破囊壶菌的方法，其特征在于，不局限于破囊壶菌，适用于海洋细菌，真菌等菌株纤维素酶活性的筛选。