[发明专利]不同功能特性的间充质干细胞在治疗不同疾病中的应用

权利要求书

1.一种单细胞转录组文库的制备方法，其特征在于，包括：

S1：制备得到单细胞悬液，所述单细胞悬液为间充质干细胞；

S2：将条形珠溶液离心后用缓冲液重悬后备用；

S3：采用自动化单细胞处理系统处理，依次加入单细胞悬液、重悬后的条形珠溶液、洗涤缓冲液1和裂解缓冲液和PBS缓冲液后，启动系统得到产物；

S4：将S3得到的产物离心后，只留下条形珠，然后加入RT mix后置于金属浴中反应后，依次使用洗涤缓冲液2、洗涤缓冲液3和无核酸酶水洗涤后，加入PCR mix后进行PCR扩增得到扩增产物；

S5：收集扩增产物后加入纯化磁珠后离心得到上清液，上清液中加入乙醇漂洗后的纯化磁珠后再次离心，构建PCR体系后进行扩增后利用XNovaNGS测序平台进行测序，得到单细胞转录组文库。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S3之前，采用无水乙醇预处理自动化单细胞处理系统，具体步骤包括：将100％无水乙醇注入芯片进样口，并移除出样口多余的液体；重复2-3次，直至芯片中不再出现气泡。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S4中，所述金属浴的反应条件为：反应温度42℃，转速1000rpm，反应90min。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，所述纯化磁珠为Ampure XP纯化磁珠；优选的，将所述Ampure XP纯化磁珠提前30min从4℃取出，使其恢复至室温。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，往扩增产物总加入纯化磁珠，所述纯化磁珠与扩增产物的体积为0.6：1，将两者混匀后室温孵育4-6min，离心后静置4-6min至液体透明澄清，移除上清至新的容器中得到上清液。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在S5中，上清液中加入80％乙醇漂洗纯化磁珠，室温孵育30s，移除上清后重复本步骤一次。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述自动化单细胞处理系统为SingleronMatrix仪器系统。

8.根据权利要求1-7所述的方法得到的单细胞转录组文库。

9.一种单细胞转录组测序方法，其特征在于，包括：采用权利要求8所述的单细胞转录组文库进行测序。

10.如下应用：

(a)权利要求8所述的单细胞转录组文库用于分析细胞亚群并鉴定细胞类型；

(b)权利要求9所述的单细胞转录组测序方法用于检测不同的疾病。