[发明专利]一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法

权利要求书

1.一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：包括以下步骤：

S1、将植物乳杆菌依次进行斜面培养、活化培养、种子培养和发酵培养，得到植物乳杆菌活菌；

S2、将枯草芽孢杆菌依次进行活化培养、种子培养和发酵培养，得到枯草芽孢杆菌活菌，且活化培养的培养方法为平板划线法；

S3、豆粕发酵：将初始含水率50％的豆粕接种到固态发酵培养基内，并分别依次接种植物乳杆菌活菌和枯草芽孢杆菌活菌进行发酵培养，得到发酵豆粕；

S4、将发酵豆粕添加到大黄鱼饲料中，得到发酵饲料。

2.根据权利要求1所述的一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：所述步骤S1中植物乳杆菌的斜面培养、活化培养、种子培养和发酵培养的具体培养方法分别为：

植物乳杆菌斜面培养：将植物乳杆菌的接种斜面在37℃恒温培养箱中培养36h后，放置于4℃冰箱保藏，每两周传代一次，得到斜面培养菌体；

植物乳杆菌活化培养：取2～3环所述斜面培养菌体接种于装有100mL液体种子培养基的250mL三角瓶中，37℃、50r/min培养24h，得到活化植物乳杆菌；

植物乳杆菌种子培养：将所述活化植物乳杆菌接种到250mL三角瓶中，并且在250mL三角瓶中装入种子培养基100mL，接种量2％，37℃、50r/min培养14h，得到种子植物乳杆菌；

植物乳杆菌发酵培养：将所述种子植物乳杆菌接种到250mL三角瓶中，并且在250mL三角瓶中装入发酵培养基100mL，接种量3％，37℃、50r/min培养14h，得到植物乳杆菌活菌。

3.根据权利要求2所述的一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：所述植物乳杆菌活化培养的液体种子培养基、植物乳杆菌种子培养的种子培养基和植物乳杆菌发酵培养中的发酵培养基的成分均为：葡萄糖20g/L，胰蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母提取粉5g/L，柠檬酸氢二铵2g/L，CH3COONa·3H2O 5g/L，K2HPO4 2g/L，MgSO4·7H2O 0.58g/L，MnSO4·H2O 0.25g/L，吐温80 1mL，且各培养基的PH值均为6.4。

4.根据权利要求1所述的一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：所述步骤S2中枯草芽孢杆菌的活化培养、种子培养和发酵培养的具体培养方法分别为：

枯草芽孢杆菌活化培养：采用平板划线法将枯草芽孢杆菌菌种接种在牛肉膏蛋白胨固体平板的营养琼脂培养基上，在37℃恒温培养箱中培养24h后，放置于4℃冰箱保藏，每两周传代一次，得到活化枯草芽孢杆菌；

枯草芽孢杆菌种子培养：挑取活化后的单菌落于装有100mL液体种子培养基的250mL三角瓶中，37℃、200r/min培养20h，得到种子枯草芽孢杆菌；

枯草芽孢杆菌发酵培养：将种子枯草芽孢杆菌接种到250mL三角瓶中，并在250mL三角瓶中装入发酵培养基100mL，调节初始pH为7.0，接种量为2％，37℃、200r/min培养20h，得到枯草芽孢杆菌活菌。

5.根据权利要求4所述的一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌活化培养中的营养琼脂培养基的成分为：牛肉浸膏3g/L，细菌学蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，琼脂20g/L，且营养琼脂培养基的PH值为7.0；

所述枯草芽孢杆菌种子培养中的种子培养基成分为：大豆蛋白胨3g/L，细菌学蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，且种子培养基的PH值为7.0；

所述枯草芽孢杆菌发酵培养中的发酵培养基成分为：可溶性淀粉15g/L，酵母粉7.5g/L，MgSO4.7H2O 2g/L，KCl 1g/L，且发酵培养基的PH值为7.0。

6.根据权利要求1所述的一种制备大黄鱼生物发酵饲料的方法，其特征在于：所述步骤S3中固态发酵培养基的成分为：豆粕50g，蒸馏水50mL，且固态发酵培养基的PH值为自然。