[发明专利]一种羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法

权利要求书

1.一种羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，其特征在于：包括如下步骤：

(1)纳米抗体的制备及筛选：分别使用限制性核酸内切酶PstⅠ和BstⅡ对质粒和质粒载体进行双酶切，将得到的VHH基因片段与质粒载体通过T4 DNA连接酶进行连接形成重组质粒，对重组质粒进行纯化，然后将纯化后的重组质粒电转化入大肠杆菌感受态细胞中进行纳米抗体的表达，纯化得到的纳米抗体蛋白；

(2)双抗夹心ELISA方法的构建：在捕获抗体中加入羽扇豆总蛋白，使其与捕获抗体结合，然后加入检测抗体，鼠抗HA单克隆抗体为一抗，HRP标记的单克隆抗体为二抗，进行显色后即成。

2.权利要求1所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，其特征在于：得到所述的纳米抗体蛋白后将带有His标签的纳米抗体作为捕获抗体，带有His和HA标签的纳米抗体作为检测抗体。

3.权利要求2所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，其特征在于：所述的捕获抗体的浓度为7.5mg/ml，检测抗体的浓度为7.5mg/ml。

4.权利要求1所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法，其特征在于：羽扇豆总蛋白的最低检测限为1.15mg/L，定量限为29.75mg/L。

5.权利要求1-4任一项所述的羽扇豆过敏原Lupan1的夹心ELISA方法的用途，其特征在于：所述的方法在制备检测试剂盒中的应用。