[发明专利]一种用于检测DNA的免疫层析试纸条及其制备方法

说明书

本发明提供了一种用于检测DNA的免疫层析试纸条，属于免疫层析检测技术领域；所述免疫层析试纸条的结合垫上喷涂有检测探针与金纳米棒的偶联物；所述检测探针为5’端巯基修饰的单链DNA；所述检测探针与待检测DNA的核苷酸序列互补配对。本发明中，金纳米棒(AuNRs)具有可调谐和更强的可见/近红外吸收、更高的表面增强拉曼散射截面、单向等离子体传播的可能性以及增强的光致发光。本发明基于AuNRs的免疫层析试纸条能够在短时间内对DNA进行灵敏和定量的视觉检测。经过对比试验，基于AuNRs的侧向流动传感器用肉眼能够检测到DNA最小浓度为10pM，比基于金纳米颗粒(AuNPs)的低20倍。

技术领域

本发明涉及免疫层析检测技术领域，尤其涉及一种用于检测DNA的免疫层析试纸条及其制备方法。

背景技术

基因是遗传的基本单元，携带有遗传信息的DNA或RNA序列，通过复制，把遗传信息传递给下一代，指导蛋白质的合成来表达自己所携带的遗传信息，从而控制生物个体的性状表达。基因检测是通过血液、其他体液、或细胞对DNA进行检测的技术。DNA检测在基因治疗、临床诊断、各种生物医学研究中都非常重要。检测DNA最常用的技术是聚合酶链反应(PCR)。PCR具有很高的灵敏度和准确性，但由于需要训练有素的人员、昂贵的仪器和相对清洁的环境，在待检样品浓度过小的情况下，PCR的效果不太好。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于检测DNA的免疫层析试纸条及其制备方法，本发明的免疫层析试纸条能够检测较低浓度待检样品，检测灵敏度高。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种用于检测DNA的免疫层析试纸条，包括底板和顺次连接在底板上的样品垫、结合垫、测试垫和吸收垫；

所述结合垫上喷涂有检测探针与金纳米棒的偶联物；所述检测探针为5’端巯基修饰的单链DNA；所述检测探针与待检测DNA的核苷酸序列互补配对；

所述检测垫上设置有检测线和质控线；所述检测线上喷涂有捕获探针与链霉亲和素的偶联物；所述捕获探针的3’端经生物素标记；

所述质控线上喷涂有质控探针与链霉亲和素的偶联物；所述质控探针的3’端经生物素修饰；所述质控探针与待检测DNA的核苷酸序列互补配对。

优选的，所述金纳米棒的长度为20～200nm。

优选的，所述检测探针与金纳米棒的偶联物的制备方法包括：

在金纳米棒中依次加入dATP、十二烷基硫酸钠水溶液、氯化钠水溶液和检测探针，进行偶联反应，离心，收集沉淀，洗涤，重悬，得到含有检测探针与金纳米棒的偶联物的溶液。

优选的，所述金纳米棒、dATP、十二烷基硫酸钠水溶液、氯化钠水溶液和检测探针的体积比为：500：5：7.5：25：85；所述dATP的浓度为1mM；所述十二烷基硫酸钠水溶液的质量浓度为1％；所述氯化钠水溶液的浓度为2M。

优选的，所述偶联反应的反应程序包括：60℃水浴中孵育3h。

优选的，所述重悬采用的试剂包括洗脱缓冲液；所述洗脱缓冲液包括以下质量份的组分：Na₃PO₄·12H₂O 304mg、牛血清蛋白2.0g、蔗糖4.0g、吐温-200.1g和水40g。

优选的，所述金纳米棒的制备方法包括以下步骤：

1)在十六烷基三甲基溴化铵水溶液中加入HAuCl₄水溶液，在搅拌过程中加入NaBH₄溶液，继续搅拌2min，得到金纳米种子溶液；