[发明专利]一种用于鉴别MCR基因分型的试剂盒、鉴别方法及其应用

说明书

本发明公开了一种用于鉴别MCR基因分型的试剂盒、鉴别方法及其应用。所述试剂盒包括SEQ ID No:1和SEQ ID No:2所示的引物对及SEQ ID No:3所示探针、SEQ ID No:4和SEQ ID No:5所示的引物对及SEQ ID No:6所示探针、SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示的引物对及SEQ ID No:9所示探针，以及SEQ ID No:7和SEQ ID No:10所示的引物对及SEQ ID No:11所示探针。本发明将mcr‑8与mcr‑10的特异性引物对采用了统一的前引物序列SEQ ID No:7后，同时选择了特异的无相互干扰的片段设计了特异性的荧光探针，实现了简化多重PCR引物体系达到良好的扩增效果，而且高度特异性的完成了mcr‑8与mcr‑10的分型。弥补了目前市面上还没有出现实现临床样本中所有MCR基因的有效分型与检测的多重PCR试剂盒的空白，特别是能有效鉴别分型mcr‑8和mcr‑10功能的多重PCR试剂盒的空白。

技术领域

本发明属于医疗卫生以及微生物检测领域，特别涉及了一种用于鉴别MCR基因分型的试剂盒、鉴别方法及其应用。

背景技术

多黏菌素（polymyxin）是发现于多黏类芽孢杆菌（Paenibacilluspolymyxa）培养液中的抗菌性多肽，有A、B、C、D、E等五种，其中多黏菌素E（colistin）和多黏菌素B（PMB）是临床中最常用的两种多黏菌素。由于其存在一定的神经毒性，在临床上的使用受到严格限制，但在亚洲、欧洲和北美，多黏菌素广泛应用于禽畜养殖业中。根据中国CHINET细菌耐药性监测，由于耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（Carbapenem-resistant enterobacteriaceae,CRE）的高感染率，多粘菌素作为最后一道防线得到重视，在对CRE菌株感染的危重患者的治疗中，多粘菌素是挽救疗法策略中最为倚重的抗菌药。

近几年，多粘菌素耐药的肠杆菌科细菌在医学临床不断出现并流行传播，成为全球卫生工作者的关注热点。到目前为止对多粘菌素耐药的CRE涵盖产KPC、NDM、VIM和IMI酶的肠杆菌科细菌。然而近几年在临床、养殖厂、动物性食物、甚至健康人群样本中，均发现对多黏菌素耐药的可转移性耐药性MCR（mobile colistin resistance）基因。其中在2015年的调查中显示，广东省健康人群的肠道菌群中MCR的携带率高达15%，这可能是由于多黏菌素在养殖业中的广泛使用，使得多粘菌素耐药基因通过动物性食品到人群的食物链进入到健康人群体中。最令人担忧的是，mcr-1可与产KPC、NDM和VIM等碳青霉烯酶的CRE同时存在，形成名副其实的“超级细菌”。这就意味着其极大的阻碍了作为抗革兰阴性菌最后一道防线的多粘菌素的使用。