[发明专利]一种用于鉴别MCR基因分型的试剂盒、鉴别方法及其应用有效
| 申请号： | 202011297101.1 | 申请日： | 2020-11-18 |
| 公开（公告）号： | CN112458191B | 公开（公告）日： | 2021-12-28 |
| 发明（设计）人： | 胡双芳;柯跃斌;吕子全;彭长凤;项秋梅;汪洋;沈建忠 | 申请（专利权）人： | 深圳市疾病预防控制中心(深圳市卫生检验中心;深圳市预防医学研究所) |
| 主分类号： | C12Q1/689 | 分类号： | C12Q1/689;C12Q1/6858;C12Q1/10 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 刘春风 |
| 地址： | 518055 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 用于 鉴别 mcr 基因 试剂盒 鉴别方法 及其 应用 | ||
1.一种非疾病诊断和治疗用途的鉴别分型mcr-1、mcr-3、mcr-8和mcr-10的方法，其特征在于，包括下述步骤：
(1)提取待测样品中的DNA；
具体步骤为：取20μL新鲜的待测样品，置于有直径2.0mmFTA滤膜片的离心管中，然后56℃干燥，干燥后的FTA滤膜片加入10％SDS溶液200微升，煮沸10min，用FTA专用缓冲液洗涤2次，然后再用TE缓冲液洗涤两次，56℃干燥后，可作为PCR反应模板；
(2)提供试剂盒；
所述试剂盒为40μL荧光PCR反应体系的试剂盒，各组分及其含量如下：
(3)将步骤(1)提取的DNA作为模板加入到步骤(2)试剂盒的PCR反应体系，进行PCR扩增反应并进行荧光PCR检测，PCR扩增反应程序条件如下：95℃2min，1个循环；95℃5sec、60℃40sec，40个循环；所述荧光PCR检测使用赛默飞世尔科技有限公司产的AppliedBiosystems ABI 7500型的实时荧光定量PCR仪；当PCR反应体系中出现单一或多重荧光探针信号时，根据预设的荧光信号对应MCR基因类型鉴别出MCR基因分型；其中不同的预设荧光信号对应不同种类MCR基因类型，测得的荧光信号为绿色FAM、红色Cy3、橙色VIC及蓝色TET时，则对应耐药基因分别为mcr-1、mcr-3、mcr-8和mcr-10。
2.一种用于鉴别MCR基因分型的试剂盒，其特征在于，其包括SEQ ID No:1和SEQ IDNo:2所示的引物对及SEQ ID No:3所示探针、SEQ ID No:4和SEQ ID No:5所示的引物对及SEQ ID No:6所示探针、SEQ ID No:7和SEQ ID No:8所示的引物对及SEQ ID No:9所示探针，以及SEQ ID No:7和SEQ ID No:10所示的引物对及SEQ ID No:11所示探针；所述试剂盒还包括：2×PCR缓冲液、Taq酶、dNTP、MgCl2、荧光探针以及FTA试纸片、10％SDS溶液、TE缓冲液；所述试剂盒为20～50μL荧光PCR反应体系的试剂盒，各组分及其含量如下：
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