[发明专利]一种用于可视化检测活细胞内肿瘤相关mRNA的DNA四棱锥的制备方法

权利要求书

1.一种用于可视化检测活细胞内肿瘤相关mRNA的DNA四棱锥，其特征在于，所述DNA四棱锥包括两条捕获探针CP和四条带有荧光标记的DNA支撑探针S1~S4，所述S1~S4引物序列为：

S1：

5'-TCGCTGAGTAAT/Cy3/AAATCAACGCCTCAACGTTAGCAAAAGCAAGTGTGGGCACGCACACAAAACACAAATCTG-3 '；

S2：

5'-CTATCGGTAGAT/Cy3/AACGCAGTCAGTGTCAGTCCAGAAAATACTCAGCGACAGATTTGTGAAAACAACTAGCGG-3'；

S3：

5'-CACTGGTCAGAT/Cy5/AAATCAACGCCTCAACGTTAGCAAAACTACCGATAGCCGCTAGTTGAAAAGGTTTGCTGA-3'；

S4：

5'-CCACACTTGCAT/Cy5/AACGCAGTCAGTGTCAGTCCAGAAAACTGACCAGTGTCAGCAAACCAAAAGTGTGCGTGC-3'；

所述DNA四棱锥的制备方法包括以下步骤：

将DNA干粉溶于1×TAE/Mg²⁺缓冲液，得到浓度为100 μM的母液备用；相关DNA经两步退火反应组装成为DNA四棱锥，具体步骤为：在1×TAE/Mg²⁺缓冲液中，等摩尔的S1，S3分别与两条捕获探针CP在金属浴中 95℃加热5min，自然冷却至室温，然后将其混合并加入等摩尔的S2和S4在PCR仪中50℃加热10min，按照3min/℃的速度冷却到25℃，4℃保持60min的程序退火，得到终浓度1μM的DNA四棱锥；

所述两条捕获探针CP的序列均为：

CP：5'-TTGGTGAAGCTAACGTTGAGGCGTT-3'；

所述1×TAE/Mg²⁺缓冲液成分包括：终浓度20mM Tris、2mM EDTA、12.5mM MgCl₂，pH7.4。