[发明专利]一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法

说明书

本发明公开了一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，包括以下步骤：获取羊角槭无菌外植体；愈伤组织诱导培养；愈伤组织增殖培养；愈伤组织分化培养。采用上述技术方案，羊角槭愈伤组织诱导培养较高，最高可达60％，另外，通过增殖培养，愈伤组织增殖，最高可达2.5倍，最终分化率可到70％，生根条数多、质量号，生根率达100％，移栽存活率高达95％，再生体系总体效率好，可移栽至城市中，用于城市绿化。此外，本发明方法简单，只需植物组织培养设备即可，实用性强、操作简单，培养环境要求低。

技术领域

本发明涉及市政园艺培养技术领域，具体指一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法。

背景技术

羊角槭是槭树科槭属树种。树皮灰褐色或深褐色，常分裂成不规则的薄片脱离，冬芽细小，圆锥状，叶纸质，基部近于心脏形或近于截形，花序顶生，伞房圆锥状，花杂性，雄花和两性花同株，小坚果扁平，近于圆形，密被黄色短绒毛，翅长圆形，张开近于水平或稍反卷；花期4月，果期9月。羊角槭属落叶乔木，树干挺拔，姿态婆娑，翅果羊角形，奇特迷人，以此得名，观赏价值和园林应用价值非常高。

但是，羊角槭具有深休眠的特性，导致羊角槭其种子繁殖能力非常低，天然更新能力较弱，培育难度非常大。因此，羊角槭很难应用值园林中，尤其城市的环境较植物而已生存环境相对较为恶劣。

为解决羊角槭的存活率，有专家提出，对羊角槭基因组DNA进行提取，并获得羊角槭SRAP最优反应体系，但是在试验中得出，羊角槭种子仍表现出较高败育率。因此，如果提高羊角槭的存活率，从而适应城市环境，是目前亟需解决的问题。

发明内容

本发明根据现有技术的不足，提出一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，能够大大提高羊角槭愈伤组织的诱导率，从而提高羊角槭的存活率。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案为：

一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，包括以下步骤：

1)获取羊角槭无菌外植体，选取当年生长状态良好、无病虫害的羊角械幼嫩茎段，并消毒；

2)愈伤组织诱导培养，将消毒后的羊角槭茎段切成0.5-1.5cm长的小段，并接种至培养好的诱导培养基内，其中诱导培养基选取WPM为基本培养基，并在WPM基本培养基内添加0.1-0.3mg.L^-1萘乙酸、0-1.0mg.L^-16-糖基氨基嘌呤、0.5-1.5mg.L^-16-苄氨基氨基嘌呤、7g.L^-1琼脂粉、30g.L^-1蔗糖，培养30天；

3)愈伤组织增殖培养，选取步骤2)中诱导培养生长较好的的愈伤组织，并接种至增殖培养基中，培养30天；

4)愈伤组织分化培养，选取步骤3)中增殖培养生长较好的的愈伤组织，并分切成颗粒状并接种至分化培养基中，培养30天，得到羊角械嫩芽。

作为优选，所述步骤2)、步骤3)、步骤4)均在光照强度为2000lx、光照时长12h.d^-1、温度23-27℃、湿度50-60％的环境下进行培养。

作为优选，所述步骤1)中对选取的羊角槭的茎段进行消毒，具体方法：将选取的羊角槭茎段用流水轻轻洗净表面污渍，后用洗洁精溶液浸泡5分钟，漂净后用流水冲洗2小时，沥干后用体积分数为75％的乙醇消毒30秒，无菌水冲洗3-5遍，后再用质量分数为0.1％的氯化汞浸泡消毒8-10分钟，消毒完后用无菌滤纸吸干表面水分。

作为优选，所述步骤1)中，在4月份或6月份的时间剪取用于培养的羊角槭茎段。

作为优选，所述步骤3)中，增殖培养基以WPM和1.0mg.L^-16-苄氨基氨基嘌呤为固定成分，另外添加0-0.15mg.L^-1萘乙酸。