[发明专利]一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法

权利要求书

1.一种用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：

1)获取羊角槭无菌外植体，选取当年生长状态良好、无病虫害的羊角械幼嫩茎段，并消毒；

2)愈伤组织诱导培养，将消毒后的羊角槭茎段切成0.5-1.5cm长的小段，并接种至培养好的诱导培养基内，其中诱导培养基选取WPM为基本培养基，并在WPM基本培养基内添加0.1-0.3mg.L^-1萘乙酸、0-1.0mg.L^-16-糖基氨基嘌呤、0.5-1.5mg.L^-16-苄氨基氨基嘌呤、7g.L^-1琼脂粉、30g.L^-1蔗糖，培养30天；

3)愈伤组织增殖培养，选取步骤2)中诱导培养生长较好的的愈伤组织，并接种至增殖培养基中，培养30天；

4)愈伤组织分化培养，选取步骤3)中增殖培养生长较好的的愈伤组织，并分切成颗粒状并接种至分化培养基中，培养30天，得到羊角械嫩芽。

2.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤2)、步骤3)、步骤4)均在光照强度为2000lx、光照时长12h.d^-1、温度23-27℃、湿度50-60％的环境下进行培养。

3.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤1)中对选取的羊角槭的茎段进行消毒，具体方法：将选取的羊角槭茎段用流水轻轻洗净表面污渍，后用洗洁精溶液浸泡5分钟，漂净后用流水冲洗2小时，沥干后用体积分数为75％的乙醇消毒30秒，无菌水冲洗3-5遍，后再用质量分数为0.1％的氯化汞浸泡消毒8-10分钟，消毒完后用无菌滤纸吸干表面水分。

4.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤1)中，在4月份或6月份的时间剪取用于培养的羊角槭茎段。

5.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤3)中，增殖培养基以WPM和1.0mg.L^-16-苄氨基氨基嘌呤为固定成分，另外添加0-0.15mg.L^-1萘乙酸。

6.根据权利要求5所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤3)中，将选取的诱导培养生长较好的的愈伤组织分切呈颗粒状。

7.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤4)中，分化培养基以WPM为基本培养基，并添加1.0mg.L^-16-苄氨基氨基嘌呤和0.1mg.L^-1萘乙酸为固定植物生长调节剂成分，另外添加0.5-2.0mg.L^-1噻苯隆。

8.根据权利要求1所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤2)中，诱导培养基中还需添加1mol.L^-1的NaOH和HCL。

9.根据权利要求8所述的用于羊角槭愈伤组织诱导的培养方法，其特征在于，所述步骤2)中PH值调节至5.8。