[发明专利]一种富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法

权利要求书

1.一种富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤1：取新生胎儿胎盘运输至实验室，取胎盘绒毛膜，进行细胞培养；

步骤2：将细胞培养至P4，收取P2-P4的细胞培养上清，标记为A液；

步骤3：将P4代细胞消化计数，生理盐水清洗，对细胞进行破碎处理，用水配置，得溶液M；

步骤4：将溶液M离心处理，弃沉淀，将上清4000rpm离心10分钟，弃沉淀，将上清标记为B液；

步骤5：将A液3000rpm离心5分钟，弃沉淀，3500rp离心5分钟，弃沉淀，将上清依次使用100μm、0.45μm、0.22μm细胞筛网过滤得C液；

步骤6：使用PBS对超滤管进行预处理，10ml每支，4000g离心10分钟；

步骤7：将C液添加至超滤管，15ml每支，4000G离心30分钟，弃上清，继续添加C液，4000G离心30分，弃上清，直到C液处理完毕，得外泌体；

步骤8：将所述外泌体使用B液等体积注射用水重悬，得D液；

步骤9：将B液和D液进行混合，得E液；

步骤10：将E液进行FGF因子检测，按照5000pg-10000pg进行浓缩，得富含亚全能干细胞外泌体原液。

2.如权利要求1所述的富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述新生胎儿胎盘在运输环境为：温度为4-8℃，时间为6小时以内。

3.如权利要求1所述的富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，步骤1中，所述生理盐水清洗的次数为3次。

4.如权利要求1所述的富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，步骤3中，所述破碎处理过程中添加注射用水的用量为：10万-100万每毫升。

5.如权利要求1所述的富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，步骤4中，所述离心的条件为：3000rpm离心10分钟。

6.如权利要求1所述的富含亚全能干细胞来源外泌体原液的制备方法，其特征在于，步骤9中，所述将B液和D液按照体积比1:1-5进行混合。