[发明专利]一种高效筛选木薯同源四倍体的方法

权利要求书

1.一种高效筛选木薯同源四倍体的方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)离体诱导木薯多倍体：取生长状态一致的新选048品种的无菌木薯组培苗，切成带单个腋芽的茎段，将茎段转接到含有秋水仙素的培养基中，然后放置于震荡仪上，在90-100r/min、27℃的条件下避光震荡培养，48h后将茎段取出，用无菌水冲洗之后吸干水分，然后接种至半固体培养基中培养，得培养植株；其中，所述秋水仙素的浓度为0.05-0.07mg/L，所述半固体培养基的成分为MS、0.05mg/L6-BA、0.02mg/L NAA、20g/L蔗糖和6.3g/L琼脂；

(2)初步筛选：通过植株的叶片形态从所述培养植株中进行筛选，即得初筛植株，所述初筛植株的叶片形态为：叶尖钝化、变圆且叶面积变大，叶片厚度相对较厚，叶片颜色浓绿；

(3)继代培养：将所述初筛植株进行编号然后进行继代培养增殖，在继代增殖过程中挑选植株叶片表型一致的植株进行下一次继代增殖，得增殖植株；

(4)干旱处理：将所述增殖植株切成带单个腋芽的茎段，将不同编号的所述增殖植株的茎段分别接种于含10%PEG-6000的MS培养基中，培养20d后取出用无菌水冲洗之后吸干水分，然后再接种于含5%PEG-6000的MS培养基中继续培养10d，得处理植株组；

(5)二次筛选：通过植株的成活情况以及叶片形态从所述处理植株组中进行筛选，即得四倍体植株组；其中，所述四倍体植株组的叶片形态为：叶片浓绿且叶尖边缘变圆，所述四倍体植株组的成活情况为：成活率超过60%；

(6)四倍体鉴定：采用流式细胞仪对所述四倍体植株组进行鉴定。

2.根据权利要求1所述一种高效筛选木薯同源四倍体的方法，其特征在于，步骤(4)中，在培养期间进行光照处理，且光周期为正常光照12h和黑暗12h。