[发明专利]一种新型冠状病毒基因组RNA的提取与试剂匹配方法

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒基因组RNA的提取方法，具体包括如下步骤：步骤1：相关基本操作，步骤2：收集相关病毒溶液，步骤3：初步离心操作，步骤4：二次离心操作，步骤5：基本溶解操作，步骤6：相关干燥操作，步骤7：产品获取和保存，本发明涉及病毒技术领域。该新型冠状病毒基因组RNA的提取与试剂匹配方法，通过步骤3和步骤4的联合设置，相关病毒溶液在被初步离心操作后，加入裂解液后被重新离心操作，大大提升了病毒外壳和RNA的裂解程度，并且在后期操作中加入了足量蛋白酶K，进一步将相关病毒外壳进行分解，方便工作人员在整体操作后期获得足量病毒RNA，整体实验逻辑清晰，方便观察和操作。

技术领域

本发明涉及病毒技术领域，具体为一种新型冠状病毒基因组RNA的提取 与试剂匹配方法。

背景技术

病毒是一种个体微小，结构简单，只含一种核酸，必须在活细胞内寄生 并以复制方式增殖的非细胞型生物。病毒是一种非细胞生命形态，它由一个 核酸长链和蛋白质外壳构成，病毒没有自己的代谢机构，没有酶系统。因此 病毒离开了宿主细胞，就成了没有任何生命活动、也不能独立自我繁殖的化 学物质。它的复制、转录、和转译的能力都是在宿主细胞中进行，当它进入 宿主细胞后，它就可以利用细胞中的物质和能量完成生命活动，按照它自己 的核酸所包含的遗传信息产生和它一样的新一代病毒。

对病毒进行全面研究时，必须精准获得相关病毒的RNA，传统的病毒RNA 提取方法十分复杂，耗时较长，在提取过程中需要使用有机有毒溶剂，气味 难闻，操作要求较高，严重提取进程。

发明内容

(一)解决的技术问题

针对现有技术的不足，本发明提供了一种新型冠状病毒基因组RNA的提 取与试剂匹配方法，解决了病毒RNA提取方法十分复杂，耗时较长，在提取 过程中需要使用有机有毒溶剂，气味难闻，操作要求较高，严重提取进程的 问题。

(二)技术方案

为实现以上目的，本发明通过以下技术方案予以实现：一种新型冠状病毒 基因组RNA的提取方法，具体包括如下步骤：

步骤1：相关基本操作：对相关参与工作的设备进行功能检测，然后通电 进入待机状态，对参与操作的相关试剂和原材料进行判断，保留完全合格的 操作原料；

步骤2：收集相关病毒溶液：将含有病毒的原液置于36-38摄氏度培养箱 中培养，然后将培养液倒入液体培养基，摇晃培养10-12小时后备用；

步骤3：初步离心操作：取1毫升样本离心，采用12000转/每分钟，离 心操作5分钟，抛弃上清液；

步骤4：二次离心操作：加入1毫升裂解缓冲液，采用12000转/每分钟， 离心操作8分钟，再次离心，抛弃上清液，加入裂解液进行溶解沉淀，70摄 氏度时放置5分钟，冷却至55摄氏度时加入足量蛋白酶K，对溶液保温1小 时，然后升高温度至90摄氏度，对蛋白酶K进行杀灭；

步骤5：基本溶解操作：加入足量的异丙醇，反复混合后，将温度降低至 65摄氏度时，静止15分钟，然后补充适量裂解缓冲液，然后冰溶3分钟；

步骤6：相关干燥操作：对上述溶液进行12000转/每分钟，离心操作5 分钟，抛弃上清液，加入5毫升乙醇，上下颠倒5次，充分混合后，再进行 离心操作3分钟，抛弃上清液后，将沉淀吹干；

步骤7：产品获取和保存：然后加入50微升纯水，溶液加热至65摄氏度 即可使用，当长期不用时，应当置于-20摄氏度时冷冻保存。

优选的，所述步骤2中，培养箱应当放置在无菌环境中操作。

优选的，所述步骤4中，裂解缓冲液由蔗糖溶液、Tris-HCl溶液、MgCl₂溶液和Triton-X-100组成。

优选的，所述步骤4中，蛋白酶K由双蒸水配置。