[发明专利]一种椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用

权利要求书

1.一种椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，所述应用包括如下步骤：

(1)椒蒿提取物的提取：椒蒿晒干剪碎后，依次用乙醇和水浸泡，旋转蒸发器浓缩后得到乙醇浸提物，再用溶剂提取乙醇浸提物，旋转蒸发器浓缩得到椒蒿提取物，2-6℃下保存备用；

(2)列当种子的表面消毒：选取适量的列当种子装入离心管中，再加入适量2.1wt％的次氯酸钠，振动摇匀，静置至沉淀；去除混合液，在离心管中继续加入蒸馏水冲洗2-4次；再加入酒精，振动摇匀，静置至沉淀；去除上层液体，剩余列当种子继续用蒸馏水冲洗2-4次后，倒在吸水纸上，晾干备用；

(3)预培养：在培养皿内铺上双层定性滤纸，加蒸馏水浸湿，在定性滤纸上放入多片玻璃纤维滤纸，将消毒过的列当种子均匀地撒在玻璃纤维滤纸片上，盖上培养皿，封口膜密封培养皿，置于25℃的恒温培养箱中暗培养4天；

(4)列当种子发芽实验：称取71.4mg椒蒿提取物于离心管中，加入甲醇溶液稀释，打孔器将玻璃纤维滤纸打成直径为8mm的滤纸片，稀释后的椒蒿提取物将滤纸片浸湿，放置干燥，最后在培养皿中铺上双层定性滤纸，加入蒸馏水浸湿至不滴漏以保持培养皿内湿润，将干燥后的玻璃纤维滤纸片放在定性滤纸上，在显微镜下挑选饱满、大小一致的步骤(3)预培养后的列当种子，每个滤纸片上放25-30粒种子，盖上培养皿，用Parafilm封口膜密封，置于25℃的恒温培养箱中黑暗培养8天，观察列当种子的发芽情况。

2.根据权利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，步骤(1)中，椒蒿晒干剪碎后，依次用体积分数为95％乙醇、75％乙醇、50％乙醇和水各浸泡48小时。

3.根据权利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，步骤(1)中，所述溶剂为正己烷、氯仿和乙酸乙酯中的一种。

4.根据权利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，步骤(1)中，得到的椒蒿提取物，收集放入棕色瓶中密封保存，置于4℃冰箱中备用。

5.根据权利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，步骤(2)中，列当种子的表面消毒，具体步骤为：选取适量的列当种子装入5mL的离心管中，用移液枪向离心管中加入适量2.1wt％的次氯酸钠，振动摇匀4min，静置1min至沉淀；用移液枪吸出混合液，在离心管中继续加入蒸馏水冲洗3次；再加入75％的酒精，振动摇匀4min，静置1min至沉淀；移液枪吸去上层液体，剩余列当种子继续用蒸馏水冲洗3次后，倒在吸水纸上，晾干备用。

6.根据权利要求1所述的椒蒿提取物在刺激列当种子发芽中的应用，其特征在于，步骤(4)中，将椒蒿提取物加入甲醇溶液分别稀释成浓度为7.14×10⁴g/mL、3.57×10³g/mL、178.5g/mL、8.93g/mL、0.45g/mL和0.022g/mL于六个离心管中。