[发明专利]GPRC5D蛋白的制备方法和应用有效
| 申请号： | 202011281208.7 | 申请日： | 2020-11-16 |
| 公开（公告）号： | CN112458094B | 公开（公告）日： | 2023-05-05 |
| 发明（设计）人： | 徐娅;易汪雪;于倩;王营;柯红;王静 | 申请（专利权）人： | 武汉华美生物工程有限公司 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C07K14/705;C07K1/22;G01N33/68;G01N33/574 |
| 代理公司： | 武汉蓝宝石专利代理事务所(特殊普通合伙) 42242 | 代理人： | 高兰 |
| 地址： | 430000 湖北省武汉市东湖开发区高新*** | 国省代码： | 湖北;42 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | gprc5d 蛋白 制备 方法 应用 | ||
【权利要求书】：
1.一种GPRC5D蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
构建重组质粒HU-GPRC5D-pET23b：
以合成的序列如SEQ ID NO.2所示的可采用无细胞表达体系表达GPRC5D蛋白的基因为模板，采用序列分别如SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的引物对进行PCR反应，获得目的片段，将目的片段与质粒载体pET23b的双酶切产物连接；
将所述重组质粒HU-GPRC5D-pET23b直接置于培养体系中，所述培养体系的组分为：体积比为50:10:3:30的大肠杆菌抽提物、复合氨基酸溶液、T7 RNA聚合酶溶液和磷酸缓冲液，pH范围7.4~7.6，于温度25~35℃、搅拌速率100~300rpm条件下进行培养，获得反应产物液；分离纯化所述反应产物液：预处理镍柱；将所述反应产物液进行预处理，制备获得上样溶液，上样于预处理后的镍柱；采用不同浓度的咪唑缓冲液进行梯度洗脱，洗脱获得目的蛋白；所述大肠杆菌抽提物的抽提方法为：通过压力破碎大肠杆菌，离心，收集上清液，即得。
2.根据权利要求1所述的GPRC5D蛋白的制备方法，其特征在于，所述双酶切位点为BamHI和XhoI。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于武汉华美生物工程有限公司，未经武汉华美生物工程有限公司许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/202011281208.7/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：电子设备
- 下一篇：一种CZT辐射探测薄膜材料的表面处理方法
