[发明专利]一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法

说明书

本发明公开了一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法，试剂盒包括：预处理液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、磁珠溶液、清洗液和洗脱液。本试剂盒不包含有毒和有刺激性气味的试剂，操作简单快速，减少了多次离心步骤，避免了离心过程中可能带来的交叉污染和离心过程中产生的剪切力对核酸的破坏，提取的DNA纯度更高。

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，尤其涉及一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法。

背景技术

近年来分子生物学技术飞速发展，基因组水平上的研究已成为广大研究者们的研究的热点。全基因组DNA是遗传信息的载体，包括编码序列和非编码序列在内的全部基因信息。从人体或动物的血液中提取高质量的DNA是基因检测、精准医疗及其他分子生物学研究的重要前提。核酸分子生物学的很多常规实验都需要以提取基因组DNA为前提，无论是基因测序、PCR扩增、基因组文库的构建等，而且提取的基因组DNA的总量及纯度和分子的结构的完整度都会影响下游的分子实验。目前已知的酚氯仿法、盐析法、吸附柱法、免疫亲和法、磁珠法等。现有DNA提取方法中可用于血液DNA提取的主要有吸附柱法和磁珠法，其中吸附柱法提取效果和所提取DNA浓度上都有明显不足，磁珠法是以磁珠为载体的分离技术具有操作简单，快速，重复性好，能从血液、动物组织、食品、病原微生物等样本中分离出DNA和RNA，可应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域，是未来核酸提取发展的重要方向。

现有的磁珠法要经过多次重复的离心，不仅费时，而且多次离心过程中产生的剪切力会对核酸造成破坏，还会带来交叉污染，因此有必要开发高效率、提取高质量DNA的方法。

发明内容

有鉴于此，本发明提出了一种高效率、低成本、操作简单、高质量的DNA的磁珠DNA提取方法。

本发明的技术方案是这样实现的：本发明提供了一种提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于，包括预处理液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、磁珠混悬液、清洗液和洗脱液，上述溶液的溶剂均为去离子水。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述预处理液为羟乙基淀粉溶液、氯化钠溶液、PBS溶液、氯化铵溶液中一种或几种溶液混合物。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述羟乙基淀粉溶液质量分数为6％，氯化钠溶液质量分数为0.1％-1.0％，PBS溶液浓度为0.1-1.0mol/L，氯化铵溶液浓度为0.15-0.50mol/L。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述结合液中异硫氰酸胍溶液浓度为4.5-5.0mol/L，Tris-HCl溶液浓度为0.01-0.05mol/L，Tris-HCl溶液的pH为6.4，EDTA溶液浓度为0.5-1.0mmol/L，EDTA溶液的pH为8.0，曲拉通X-100溶液体积分数0.1％-10％。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述裂解液包括Tris-HCl溶液、EDTA溶液和SDS溶液，Tris-HCl溶液浓度为0.1-1.0mol/L，Tris-HCl溶液的pH为7.5，EDTA溶液浓度为0.02-0.05mol/L，EDTA溶液的pH为8.0，SDS溶液体积分数1.25％-2.0％。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述磁珠混悬液浓度为40-50mg/mL。

在以上技术方案的基础上，优选的，所述洗脱液包括Tris-HCl溶液和EDTA溶液，Tris-HCl溶液浓度为8-10mmol/L，EDTA溶液浓度为0.5-1.0mmol/L。

所述磁珠溶液的磁珠采用内核为超顺磁性四氧化三铁，表面包覆有硅羟基磁珠。