[发明专利]一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于，包括预处理液、细胞裂解液、结合液、蛋白酶K溶液、磁珠混悬液、清洗液和洗脱液，上述溶液的溶剂均为去离子水；

所述预处理液为羟乙基淀粉溶液、氯化钠溶液、PBS溶液、氯化铵溶液中的一种或几种溶液混合物。

2.如权利要求1所述的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述羟乙基淀粉溶液质量分数6％，氯化钠溶液质量分数为0.1％-1.0％，PBS溶液浓度为0.1-1.0mol/L，氯化铵溶液浓度为0.15-0.50mol/L。

3.如权利要求1所述的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于，所述结合液包括异硫氰酸胍溶液、Tris-HCl溶液、EDTA溶液和曲拉通X-100溶液；其中异硫氰酸胍溶液浓度为4.5-5.0mol/L，Tris-HCl溶液浓度为0.01-0.05mol/L，Tris-HCl溶液的pH为6.4，EDTA溶液浓度为0.5-1.0mmol/L，EDTA溶液的pH为8.0，曲拉通X-100溶液体积分数0.1％-10％。

4.如权利要求1所述的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于：

所述裂解液包括Tris-HCl溶液、EDTA溶液和SDS溶液，Tris-HCl溶液浓度为0.1-1.0mol/L，Tris-HCl溶液的pH为7.5，EDTA溶液浓度为0.02-0.05mol/L，EDTA溶液的pH为8.0，SDS溶液体积分数1.25％-2.0％；

所述磁珠混悬液浓度为40-50mg/mL；

所述洗脱液包括Tris-HCl溶液和EDTA溶液，Tris-HCl溶液浓度为8-10mmol/L，EDTA溶液浓度为0.5-1.0mmol/L；

所述磁珠溶液的磁珠采用内核为超顺磁性四氧化三铁，表面包覆有硅羟基磁珠。

5.如权利要求1所述的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒，其特征在于：所述清洗液包括第一清洗液和第二清洗液，第一清洗液包括Tris-HCl溶液、氯化钠溶液、异硫氰酸胍溶液和乙醇溶液，Tris-HCl溶液浓度为10-20mmol/L，Tris-HCl溶液的pH为8.0，氯化钠溶液浓度为10-20mmol/L、异硫氰酸胍溶液浓度为3-5mol/L，乙醇溶液体积分数为55％-70％；第二清洗液为乙醇溶液，体积分数为70％-80％。

6.根据权利要求1的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒的使用方法，具体包括：

S1，向1.5ml的离心管中加入200-400μl血样和800-1600μl预处理液，震荡混匀，转速12000r/min条件下离心3-5min，去除上清液，得到沉淀物；

S2，向上述沉淀物中加入200-400μl裂解液和20-50μl蛋白酶K溶液，涡旋振荡离心管30s使其充分混匀，置于恒温金属浴中60℃-65℃温浴10-20min，温浴期间拿出离心管涡旋震荡3-4次，每次30s；

S3，将离心管从恒温金属浴中取出，加入2-3mg磁珠溶液，250-300μl结合液，涡旋振荡5min后，将离心管置于磁力架上静止至磁珠完全吸附，去除上清液；

S4，将离心管从磁力架上取下，加入500-700μl第一清洗液，涡旋振荡30s，重新将混匀好的离心管放置磁力架上静止至磁珠完全吸附，去除上清液，用第二清洗液重复上述清洗操作2次；

S5，将离心管放置56℃的恒温金属浴中温浴3-5min，取出离心管，加入50-100μl洗脱液，涡旋振荡30s后放置56℃的恒温金属浴内温浴3-5min；

S6，取出离心管，放置于磁力架上30s，吸出洗脱液转移至新的1.5ml的离心管中，获得提取后的DNA产物。

7.使用权利要求1所述的一种磁珠法提取血液基因组DNA的试剂盒在血液、组织、唾液、细胞内的基因组DNA提取上的应用。