[发明专利]一种包载磁性外泌体的难愈性创面敷料的制备方法及其应用

说明书

本发明公开了一种包载磁性外泌体的难愈性创面敷料的制备方法及其应用，制备方法为首先将壳聚糖溶液与β‑甘油磷酸钠溶液混合，得到混合溶液I；然后向混合溶液I中加入羟乙基纤维素溶液，得到混合溶液II；人间充质干细胞与Fe₃O₄超顺磁性纳米粒共孵育后提取得到磁性外泌体，并将磁性外泌体加入上述混合溶液II中，制备出一种包载磁性外泌体的温敏水凝胶敷料。该方法制得的水凝胶敷料具有优异的温敏性，可注射给药，同时具备抗菌、促进新生血管生成等作用，该水凝胶敷料在促进难愈性创面修复中具有良好的应用前景。

技术领域

本发明属于可降解生物医用材料技术领域，具体而言，涉及一种生物活性的难愈性创面敷料的制备方法及其应用。

背景技术

随着我国社会经济的发展，人口老龄化问题以及人民生活方式的改变，社会慢性病疾病谱也发生了变化，老年疾病和代谢疾病的高发使得慢性难愈创面的发病率逐渐增高。其中，介于20岁至79岁的人群中糖尿病的患病率迅速增长，预计到2030年糖尿病患病率将达到7.7％(约4.39亿)。由糖尿病引发的糖尿病足溃疡是一种典型的糖尿病并发症，其表现为创面部位迁延难愈，最终发展为慢性难愈性创面，严重可导致截肢，甚至危及生命。因此，有效的难愈性创面治疗手段及敷料亟待开发。研究发现，在慢性难愈性创面中，血管新生能力障碍可导致缺血区域的细胞死亡，阻碍创面修复和组织再生，因此，促进新生血管生成是治疗难愈性创面的一个有效途径。

外泌体是细胞经过“内吞-融合-外排”等一系列调控过程形成并分泌的直径为40～100nm的纳米级别亚细胞双层膜囊泡，内含蛋白质、miRNAs、lncRNAs等多种生物活性分子，在细胞间物质运输和信号通讯中发挥重要作用。近期大量研究发现，干细胞外泌体可以通过调控炎症反应、促进血管生成和成纤维细胞增殖及再上皮化等多种途径来促进创面的愈合。干细胞外泌体是一种能被大多数干细胞分泌的微小囊泡，由脂质、蛋白质和核酸组成。与干细胞治疗相比，干细胞外泌体可避免免疫排斥、致瘤、栓塞等问题；与单一细胞因子相比，干细胞外泌体具有更丰富的生物活性和更大的组织再生潜能，因此成为近年来再生医学的研究热点和创面修复的明星材料。

本发明通过干细胞与Fe₃O₄超顺磁性纳米粒共孵育后提取得到磁性外泌体，所制备的磁性外泌体除具备促进骨再生能力外，还具备促进新生血管形成的能力，因此对难愈性创面修复具有重要作用，然而，磁性外泌体体内清除速率快、半衰期短、不能维持游离外泌体活性，极大地阻碍了其在创面修复中的应用，因此开发能有效负载并缓慢释放磁性外泌体的生物活性支架对于难愈性伤口的愈合是至关重要的。进一步，本发明通过将温敏水凝胶和制备得到的磁性外泌体进行结合，得到包载磁性外泌体的温敏水凝胶敷料，经实验验证，发现制备得到的包载磁性外泌体的温敏水凝胶敷料可以响应环境温度变化而发生溶胶-凝胶的转变，在室温或者低于室温时能够保持液体状态，当温度升高至生理温度(37℃)后形成半固体凝胶，这一特性有利于局部注射治疗，胶凝后的敷料可粘附在创面部位并对创面实行有效封闭，减少接触性细菌感染的机会，温敏水凝胶负载的生物活性因子能够实现驻留和缓释的效果，进一步促进创面修复，加速愈合，是一种有效的新型生物活性敷料，在临床上如糖尿病溃疡等疾病中具有良好的应用前景。但是，目前包载磁性外泌体的温敏水凝胶敷料仍未见报道。

发明内容

针对目前现有技术中包载磁性外泌体的温敏水凝胶敷料的研究空白和现有的难愈性创面敷料存在的不足，本发明的目的在于提供一种包载磁性外泌体的难愈性创面敷料的制备方法及其应用，该方法制备工艺简单，制得的水凝胶敷料具有优异的温敏性和可注射性，便于临床给药，同时该生物活性水凝胶敷料能有效促进新生血管生成，具有加速慢性难愈性创面修复的作用，可作为临床上如糖尿病溃疡等疾病的新型生物活性敷料。

本发明的上述目的通过以下技术方案得以实现：

本发明的第一方面提供了一种包载磁性外泌体的难愈性创面敷料。

进一步，所述敷料包括磁性外泌体、温敏水凝胶。